16 февраля 2012

Деструктивные изменения в клетках эксплантатов семенника и яичника

Исследования, проведенные в первые 48 ч как на живых клетках с помощью визуального наблюдения и цейтраферной микрокиносъемки, так и на фиксированных и окрашенных тотальных препаратах эксплантатов, показали, что под влиянием больших доз специфических цитотоксических сывороток в клетках эксплантатов семенника и яичника происходят резко выраженные деструктивные изменения. В тех случаях, если исследование проводилось с помощью микрокиносъемки, то в течение 12 ч производилась съемка интактных клеток. Затем, не сдвигая препарат, через боковое отверстие камеры вводилась питательная среда, содержащая специфичную для данных клеток цитотоксическую сыворотку, и вновь производилась съемка этой же группы клеток.

Данные микрокиносъемки показали, что реакция клеток на большую дозу специфичной для них цитотокеической сыворотки наступает уже через несколько минут после контакта с ней клеток. В клетках вначале усиливаются, а затем замедляются токи цитоплазмы, цитоплазматические отростки клетки постепенно втягиваются и все тело клетки округляется, сжимается и уменьшается в объеме.

На тотальных гистологических препаратах эксплантатов, окрашенных гематоксилином Вейгерта, можно было наблюдать изменения как отдельных клеток, так и всей зоны роста. Заметные признаки поражения клеток и нарушение структуры зоны роста наблюдались через 1 ч после начала воздействия сыворотки.

Укорочение отростков и сжимание клеток приводило к тому, что связи между клетками либо полностью нарушались, либо оставались в виде очень тонких цитоплазматических тяжей, на которых держалось сжавшееся и округлившееся тело клетки. Последнее чаще наблюдалось в культурах тканей яичника, где связь между клетками эпителиоидной мембраны выражена сильнее.


Участок зоны роста эксплантата яичника (контроль)

Участок зоны роста эксплантата яичника (контроль)

Окраска гематоксилином Вейгерта. Ок. 7 X об. 10.


На рисунке выше представлен участок зоны роста эксплантата яичника из контрольного опыта, а на рисунке ниже — аналогичный эксплантат после воздействия большой дозы АОЦС.


Нарушение структуры зоны роста эксплонтанта яичника после воздействия большой дозы АОЦС

Нарушение структуры зоны роста эксплонтанта яичника после воздействия большой дозы АОЦС

Окраска гематоксилином Вейгерта. Ок.7 х об. 10.


Видна деструкция зоны роста.

В эксплантатах семенника, где зона роста обычно более рыхлая, разрыв межклеточных связей и нарушение правильного взаимного расположения клеток приводили к появлению групп из нескольких слипшихся клеток. Они имели вид конгломератов неправильной формы, в которых не всегда можно было различить отдельные клетки.


Участок зоны роста эксплантата семенника (контроль)

Участок зоны роста эксплантата семенника (контроль)

Окраска гематоксилином Вейгерта. Ок.10 X об.20.


На рисунке выше показан общий вид зоны роста контрольного эксплантата семенника, а на рисунке ниже — аналогичный эксплантат после воздействия большой дозы АТЦС.


Вид зоны роста эксплантата семенника через 3 ч после начала воздействия большой дозы АТЦС

Вид зоны роста эксплантата семенника через 3 ч после начала воздействия большой дозы АТЦС

Окраска гематоксилином Вейгерта. Ок. 10 X об. 20.


Изменения, наблюдавшиеся в клетках семенника и яичника после воздействия больших доз специфичной для данного вида ткани цитотоксической сыворотки, сводились в основном к следующему: пикноз ядра, вакуолизация цитоплазмы, уменьшение клеток в объеме. В отдельных случаях как при исследовании живых клеток, так и на гистологических препаратах можно было наблюдать на поверхности клетки пузыревидные вздутия.


Пузыре видные вздутия на поверхности клетки эксплантанта
семенника после воздействия большой дозы АТЦС

Пузыре видные вздутия на поверхности клетки эксплантанта семенника после воздействия большой дозы АТЦС

Окраска гематоксилином Вейгерта. Ок.20 X об.40.


Процесс этот, по нашим наблюдениям на живых клетках, может варьировать у разных клетках одной и той же ткани от одиночных до многочисленных вздутий, захватывающих всю видимую поверхность клетки. В процессе микрокиносъемки мы наблюдали, что в зависимости от интенсивности этого процесса вздутия могут либо исчезнуть и поверхность клетки как бы «успокаивается», либо могут приводить к разрушению оболочки клетки и выходу клеточного содержимого в окружающую среду. Поскольку этот процесс очень непродолжителен и наступает в клетках неодновременно, то его не всегда можно обнаружить.

При электронно-микроскопических исследованиях клеток эксплантатов также наблюдались изменения контуров протоплазматической мембраны клеток.

У клеток контрольных эксплантатов семенника контуры оболочек клеток были, как правило, гладкими, После воздействия большой дозы АТЦС на оболочках клеток, особенно в тех участках, где происходила интенсивная вакуолизация цитоплазмы, обнаруживались выступы самой разнообразной формы. Нередко у основания таких выступов наблюдались ограниченные мембраной вакуоли.


Участок потоплазмической мембраны и эктоплазмической зоны
клетки конторольного эксплантанта семенника

Участок потоплазмической мембраны и эктоплазмической зоны клетки конторольного эксплантанта семенника

Х 11500.


На рисунке ниже показан участок эктоплазматической зоны и протоплазматической мембраны клетки контрольного эксплантата семенника, а на рис. 10 — аналогичный участок клетки, подвергнутой воздействию большой дозы АТЦС.


Клетка эксплантата семенника через 3 ч после воздействия большой дозы АТЦС

Клетка эксплантата семенника через 3 ч после воздействия большой дозы АТЦС

Образование выступов на протоплазматической мембране и вакуолизация цитоплазмы. Х 11 500


Видна интенсивная вакуолизация цитоплазмы и образование выступов на клеточной мембране.

Еще более интенсивное развитие этих образований на клеточной оболочке наблюдалось после воздействия на клетки эксплантатов семенника цитотоксической сыворотки, полученной по отношению к микросомальной фракции клеток семенника.


Участок протоплазматической мембраны клетки эксплантата семенника через 3 ч
после воздействия большой дозы антимикросомальной АТЦС

Участок протоплазматической мембраны клетки эксплантата семенника через 3 ч после воздействия большой дозы антимикросомальной АТЦС

Х 17 500.


Как известно, при фракционном центрифугировании в этой фракции осаждаются в основном мембранные структуры клетки — обрывки оболочки клетки и мембран эндоплазматического ретикулума, к которым и образуется основная масса антител при использовании этой фракции в качестве антигена для иммунизации животных.
На электронно-микроскопических препаратах клеток эксплантатов семенника после воздействия большой дозы АТЦС обнаруживались изменения всех внутриклеточных структур. Ядра вначале деформируются, приобретая довольно причудливые очертания, а в дальнейшем подвергаются кариопикнозу либо кариолизису.

При пикнозе ядра рассеянные в нуклеоплазме гранулки дезоксирибонуклеопротеида либо собираются в конгломераты и образуют участки электронноплотного вещества, либо располагаются широкой темной полосой вдоль ядерной мембраны. Ядро приобретает вид темного, плотного, неправильной формы образования. При кариолизисе ядра лишены внутреннего содержимого и выглядят оптически пустыми.


«Действие специфических цитотоксических сывороток
на половые железы», под ред. Р.Е.Кавецкого



Улезко-Строганова К. Я. Рост яичников in vitro. — Труды Центр, науч.-исслед. акушер.-гинекол. ин-та НКЗ СССР, 1935, 1, с. 58 — 66. Уманский Ю. А. Исследование накопления радиоактивных изотопов в опухолях при введении их в организм в составе противоопухолевых сывороток. — В кн.: Опыт применения радиоактивных изотопов в медицине. К., 1955, с. 100 — 104. Физиология…

Abramoff P. Saunders J., Gasseling М. Cytotoxicity of heterologous immune chicken serum to normal and neoplastic mouse tissues in culture. — J. Nat. Cancer Inst., 1961, 28, N 3, p. 585 — 599. Allen E. The oestrus eycle in the mouse. — Amer. J. Anat., 1922, 30, p. 297 — 312. Alloiteau G. Y. Effects…

Kay W. W., Whitehead R. The Role of Impurities and mixtures of isomers in the staining of rat by commercial sudans. — J. Pathol. Bact., 1941, 53, N 2, p. 279 — 284. Kobayashi Т., Sato H.§ Maruyama M.f Aral K., Takezawa S. Persistent estrus produced in rats by hypothalamic lesions. — Endocrinol. Japanica, 1959,…

Самборская Е. П. Влияние избытка аскорбиновой кислоты на функцию генеративных органов. Автореф. докт. дис. К., 1965. Селезнев Я. М. К нормальной и патологической физиологии яичника (экспериментальные гистологические исследования). Дис. СПб., 1891. Сердюков М. Г. Современный взгляд на функциональное значение овариального фолликула и его инкретов. — Клинич. медицина, 1928, № 19, с. 1270 — 1281. Серов…

Имшенецкая Л. Я. Экспериментально-клинические данные об эндокринных изменениях при крипторхизме. Автореф. канд. дис. К., 1970. Ирд Е. А., Маркарян Д. С. Экспериментальная гормонотерапия фолликулярных кист яичников у крыс — Проблемы эндокринологии и гормонотерапии, 1963, 9, № 5, с. 55 — 59. Йорданов Ж., Анастасова-Кръестева М., Хаджиолов Л. И., Бояджиева-Михайлова Л. Принос към експерименталната хистология на…