Исследование распределения вирусспецифических последовательностей

Исследование распределения вирусспецифических последовательностей в ДНК клеток различных органов незараженных и зараженных AMV цыплят показало, что все нормальные ткани содержат примерно равные количества ДНК, комплементарной 35S РНК AMV, что соответствует 1 — 3 копиям на гаплоидный клеточный геном.

У зараженных цыплят все ткани можно разделить на 3 категории:

1. мышцы и мозг, в которых концентрация вирусной ДНК остается без изменений после инфекции;
2. сердце, легкие, печень и селезенка, в которых концентрация вирусной ДНК увеличивается на 50%;
3. лейкозные миелобласты, эритроциты и почки, в которых количество вирусной ДНК возрастает в 2 — 3 раза. Для выяснения природы вирусспецифических последовательностей после инфекции ³H-35S РНК AMV сначала гибридизировали с избытком ДНК из нормальных клеток в условиях насыщения.

Гибрид отделяли хроматографией на оксиапатите, а ³Н-РНК, которая не гибридизировалась с ДНК из нормальных клеток, подвергали рехроматографии с ДНК из инфицированных клеток.

Таким образом установили, что вирусспецифические последовательности опухолевых клеток появляются в этих клетках уже после инфекции и неидентичны тем, которые присутствуют в нормальных клетках.

Dastoor и соавт. (1977) провели специальное исследование мест интеграции онкорнавирусов птиц у различных хозяев.

Использованы следующие системы:

1. эмбриональные клетки уток, зараженные вирусом саркомы птиц В77, в которых происходит как продукция вируса, так и трансформация клеток; 
2. утиные клетки, инфицированные лейкозным вирусом RAV61, ассоциированным с RSV, в этой системе вирус размножается без трансформации клеток;
3. мышиные ЗТЗ клетки, зараженные вирусом В77, в которых наблюдается трансформация, но нет продукции вируса.

Оказалось, что в фибробластах эмбриона утки провирусная ДНК В77 и RAV61 преимущественно интегрируется в уникальные участки клеточной ДНК. В непермиссивных клетках ЗТЗ мышей около 50% провирусной ДНК В77 ассоциируется с повторяющимися областями клеточной ДНК, а оставшаяся вирусная ДНК, вероятно, интегрируется с уникальными участками ДНК клетки.

Установлено, что РНК из хелпер-независимого, клонированного штамма RSV характеризуется высоким уровнем гибридизации с ДНК из клеток сарком и фибробластов, трансформированных in vitro (по сравнению с ДНК из нормальных клеток).

В инфицированных клетках выявляются 2 — 4 копии вирусного генома на гаплоидный геном. РНК эндогенных вирусов птиц субгруппы Е гибридизируется с ДНК нормальных клеток в большей степени, чем РНК из RSV.

В этом случае в клетках определяется на 1 — 2 копии вирусного генома больше, чем при инфицировании RSV.

Значительная доля фракции генома RSV (но не весь геном), которая способна образовывать гибриды с ДНК нормальных клеток, сходна с геномом эндогенного RAV0.

Из этих данных следует, что приблизительно 1/3 информации, вносимой RSV, является «экзогенной» для клетки и именно в этих последовательностях и локализован sarc-ген.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко