13 июля 2012

Т-антигены и трансформация

Установлено, что частично очищенный Т-антиген способен связываться с двуспиральной нативной ДНК клетки и со сверхскрученной ДНК SV40. Точка соединения Т-антигена на вирусной ДНК картирована с помощью электронной микроскопии при использовании антител с ферритиновой меткой.

Она оказалась близкой (или идентичной) точке инициации репликации вирусной ДНК (0,67 ед. карты). В то же время рекомбинации между ДНК клетки и вируса, возникающие при литической инфекции, преимущественно локализованы в трех точках — 0,20; 0,25 и 0,31 ед. карты генома SV40, т. е. они далеки от точки связывания Т-антигена. Важно подчеркнуть, что вирусная ДНК при продуктивной инфекции интегрируется главным образом в области повторяющихся последовательностей клеточной ДНК и, по-видимому, этот процесс носит относительно специфический характер.

С другой стороны, при анализе делеционных мутантов SV40 также не выявлено участие Т-антигена во внутривидовой рекомбинации, которая осуществляется в участках генома SV40, удаленных от точки инициации синтеза ДНК.

Возможно, эти процессы катализируются вирионной эндонуклеазой или же иными ферментативными системами клетки или вируса. Вместе с тем анализ рекомбинаций, происходящих при трансформации, свидетельствует о высокой специфичности этого процесса.

Структура вирусной ДНК нарушается в основном во фрагментах С и F (образующихся при действии рестриктазы Hind), о чем свидетельствуют данные экспериментов по освобождению генома SV40 из трансформированных клеток разных линий (Botchan et al., 1975). По спектру синтезированных вирусспецифических мРНК в клетках, трансформированных SV40, определена точка интеграции вирусного генома с клеточным, локализующаяся в области поздних вирусных генов внутри фрагмента С и примыкающего к нему фрагмента D (Khoury et al., 1976). Полагают, что мутация в гене in(ts) ведет к термолабильности Т-антигена и некоторые антигенные детерминанты этого белка необходимы для поддержания интеграции ДНК SV40 (Lockwood et al., 1977).

Получены данные, согласно которым число участков стабильной интеграции, связанной с трансформацией, лимитировано в геноме каждой клеточной линии и все участки насыщаются при заражении вирусом при высокой множественности инфекции. В случае низкой множественности эти участки интеграции, локализованные, вероятнее всего, в области уникальных последовательностей клеточной ДНК, насыщены не полностью и последующая суперинфекция приводит к дополнительной интеграции.

Таким образом, хотя точка встраивания вирусного генома в хромосомальную ДНК клетки не определена, можно думать о высокой специфичности интегративной рекомбинации, приводящей к неопластической трансформации.

Итак, совокупность имеющихся экспериментальных фактов позволяет постулировать вероятность существования двух ферментативных систем рекомбинации при инфекции ДНК-содержащими онковирусами. Первая система, характерная для продуктивной инфекции, обусловливает разрывы в разных точках вирусной ДНК, вероятно, за счет вирионной эндонуклеазной активности или ферментов клетки.

Вторая система осуществляет, по-видимому, разрыв в одной точке ДНК SV40, близкой или совпадающей с точкой инициации синтеза вирусной ДНК. Такие одиночные разрывы, очевидно, являющиеся пусковым механизмом специфической интегративной рекомбинации, которая иногда приводит к опухолевой трансформации, могут производиться, как установили В. С. Шапот и соавт. (1976), препаратом Т-антигена.

Следовательно, вполне логично предположение авторов относительно двойной биологической функции Т-антигена в качестве инициатора синтеза вирусной ДНК и ключевого фермента интеграции, определяющего ее специфичность.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…