28 июня 2012

Полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию.

Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином.

Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства по последовательностям аминокислот.

Молекула каждого р30 начинается с идентичной последовательности про — лей — арг.

Другой одинаковый для этих белков участок располагается с 11-го по 24-е положение. В этом участке имеется лишь одна особенность: у вирусов мышей в 17-м положении обнаружен серии, а у вирусов кошек — аланин.

Белок р30 GaLV отличается от всех исследованных р30 тем, что в его молекуле имеется вставка из 7 остатков перед гомологичным участком, начиная с 11-го остатка.

Внутри р30 вирусов мышей С-типа участки 4 — 10 весьма сходны, этот фрагмент в молекуле р30 вирусов различных видов млекопитающих значительно варьирует.

Вероятно, участок 4 — 10, по крайней мере для р30 вирусов мышей, может быть охарактеризован как видоспецифический или филогенетически ассоциированный.

Известны три онкорнавируса мышей С-типа, способных трансформировать фибробласты (FT+): саркомы Харви (На — MSV) саркомы Молони (Mo — MSV) и вирус Абельсона.

Геномы На — MSV и Mo — MSV представляют собой рекомбинанты, содержащие два класса нуклеотидных последовательностей, один из которых соответствует части генома Mo — MSV, а другой состоит из последовательностей клеток хозяина. Parks и соавт. (1976) исследовали MuLV специфические последовательности, сравнивая экспрессию вирусных РНК и белок в различных типах клеток, зараженных этими вирусами.

Оказалось, что разные РТ+-вирусы экспрессируют в инфицированных клетках различные участки генома MuLV и синтезируют различные полипептиды. РТ+-вирусы, дефектные по репликации, не синтезируют gp70 и обратную транскриптазу.

Белки р10, р12 и р15 могут быть экспрессированы независимо от наличия или отсутствия р30 в разных изолятах FT+-вирусов.

Иными словами, экспрессия низкомолекулярных белков в большей степени связана с выражением трансформирующих функций вируса, чем с экспрессией р30, и мало связана с экспрессией gp70 и обратной транскриптазы.

Установлена четкая корреляция между уровнем экспрессии РНК MuLV и количеством продуцирующихся полипептидов. Экспрессия РНК и белка не изменялась в трансформированных клетках даже при суперинфекции гетерологичным вирусом-помощником С-типа. Следовательно, блок в репликации FT+-вирусов связан с делецией в геноме, а не с транскрипцией или трансляцией интегрированного генома.

Итак, основное отличие онкорнавирусов от ДНК-содержащих онковирусов состоит в том, что инфекция последними может сопровождаться либо репликацией, либо интеграцией, в то время как у первых процесс интеграции является одним из этапов репликации и трансформации в пермиссивной системе.

Геном онкорнавирусов интегрируется в виде высокополимерных ДНК-транскриптов, по размерам соответствующих субъединицам вирионной РНК. Продукты транскрипции интегрированных геномов представляют собой вирионную 35 — 40S РНК, кодирующую вирусспецифические белки.

Пока неизвестно, существуют ли три класса 35 — 40S РНК, один из которых включается в вирусные частицы, а второй выполняет функцию мРНК, или же имеется лишь один класс, выполняющий обе функции. Все вирусные гены экспрессируются в инфицированных клетках.

Вирусные полипептиды синтезируются в зараженных клетках в виде предшественников, созревание которых осуществляется путем расщепления на отдельные протеины.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…

РНК-содержащие вирусы по способности их геномных РНК к трансляции в бесклеточных системах биосинтеза белка делятся на два класса: содержащие транслируемую, плюс-геномную РНК; содержащие нетранслируемую, минус-геномную РНК. Все транслируемые РНК представляют собой полицистронные матрицы с одним участком инициации, синтезирующие в бесклеточных системах и в зараженных клетках вирусные полипептиды в виде гигантских предшественников, расщепление которых специфическими протезами…