26 июня 2012

Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S.

Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой около 3Х106, что собственно соответствует размерам субъединиц вирионной РНК.

Установлено, что вначале синтезируются полипептиды, являющиеся предшественниками gs-антигенов. Так, в клетках, зараженных AMV, таким предшественником является полипептид с молекулярной массой 76 000 (Рr76), синтез которого начинается через 3 ч после инфекции.

Низкий уровень его синтеза поддерживается до 7-го часа, а затем между 7-м и 9-м часом происходит 5-кратное возрастание синтеза и этот уровень сохраняется до 24-го часа. В клетках, обработанных до или во время инфекции актиномицином D или цитозинарабинозидом, синтез предшественника наблюдается и на ранних этапах инфекции (3 — 7 ч). Количество Рr76, синтезированного в присутствии этих ингибиторов синтеза ДНК, практически не отличалось от такого в необработанных клетках.

На основании полученных данных можно предполагать, что проникшая в клетку вирусная РНК функционирует в качестве мРНК для Рr76.

Расщепление этого предшественника начинается с С-концевых последовательностей, первым отделяется белок с молекулярной массой 14 000, затем из оставшегося полипептида последовательно образуются белки с молекулярными массами 28 000, 17 000 и 10 000 (Gallis et al., 1976). Такая строгая последовательность в созревании вирусных белков свидетельствует о том, что специфические протеиназы начинают расщепление предшественника только после завершения процесса трансляции.

При анализе экспрессии генов онкорнавирусов птиц на уровне белкового продукта показано, что все исследованные клетки (gs+ и gs) синтезируют вирусные р27, р19 и р15 (Halpern et al., 1975). Соотношение вирусных белков в клетке примерно такое же, как и в вирионе, с той лишь разницей, что количество р15 несколько больше.

В клетках, способных поддерживать репликацию RSV (gshe и gs+he), кроме указанных белков синтезируется гликопротеид вирусной оболочки — gp85, a в клетках, лишенных «хелперной» активности, gp85 не продуцируется. В нормальных куриных сhf+-клетках, не продуцирующих вирусных частиц, количество gp85 колеблется от 0,06 до 0,1% от содержания тотального клеточного белка.

При инфекции RSV количество gp85 резко возрастало. Gupta и соавт. (1975) определили концентрацию р27, р 19 и р 15 в незараженных и продуктивно трансформированных RSV клетках. В нормальных клетках количество каждого из белков не превышало 10 нг на 1 мг тотального клеточного белка, тогда как в зараженных клетках наблюдалось резкое возрастание уровня р27, р19 и р15 до 520, 1400 и 650 нг/мг соответственно.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…

На различных системах клеток, нормальных и трансформированных (спонтанно и под воздействием концерогенных факторов разной природы), были установлены три типа экспрессии вирусного генома, включенного в хромосомы и начавшего функционировать и реплицироваться вместе с генами хозяина. К первому типу относятся полная транскрипция и трансляция вирусного генома, обусловливающая спонтанную продукцию инфекционного вируса, второй тип характеризуется частичной экспрессией вирусной…