12 июня 2012

Геном онкорнавирусов в трансформированых клетках

Изложенные выше факты позволяют представить общие начальные этапы процесса репликации онкорнавирусов и трансформации, индуцированной ими. Вирусспецифическая ДНК синтезируется обратной транскриптазой в цитоплазме пермиссивных клеток в течение первых 9 ч инфекции, а в непермиссивной системе синтез продолжается до 12 ч.

Синтез ДНК, направляемый РНК-зависимой ДНК-полимеразой разрушенного RSV, инициируется in vitro путем ковалентного присоединения дезокси-нуклеотидов к 3´-концу РНК-затравки.

Идентифицированы нуклеотиды, участвующие в образовании этой связи, рА и дА. В процессе синтеза ДНК, вероятно, первостепенная роль принадлежит обоим ферментам обратнотранскриптазного комплекса: РНК- и ДНК-зависимым ДНК-полимеразам.

Молекулы синтезированных двуспиральных вирусных ДНК представляют собой линейные формы (или замкнутые циркулярные, у которых могут быть разрывы в отдельных нитях). Их размер соответствует размеру субъединиц вирусного генома (с массой 3Х106). В клетках обнаружены двуспиральные молекулы вирусных ДНК с молекулярной массой 5,5 — 6,6Х106 (Gianni et al., 1976; Ramareddy et al., 1976).

Затем вирусспецифическая ДНК, содержащая практически всю генетическую информацию вирусного генома, мигрирует в ядро, в котором ковалентно связывается с хромосомальной ДНК клетки между 9-м и 24-м часом инфекции (пермиссивная система) и через 22 ч (непермиссивная система).

Предварительно эта ДНК циклизуется, что, вероятно, является необходимым условием для процесса интеграции. Кинетика интеграции ДНК-провируса имеет сходный характер как для трансформирующих, так и для нетрансформирующих онкорнавирусов.

Следовательно, инфекция онкорнавирусами как естественных, так и неприродных хозяев сопровождается интеграцией вирусной ДНК с генетическим аппаратом клетки. В первом случае имеют место как продукция вируса, так и трансформация. Поскольку нормальные клетки птиц и мышей содержат в составе своего генома сегмент (или сегменты), комплементарные вирусному геному, то в этом случае происходит дополнительная интеграция вирусных ДНК-последовательностей.

В случае же неприродных хозяев (вирогенные клетки млекопитающих, зараженные онкорнавирусами птиц) вирусная генетическая информация фиксируется первоначально.

В клетках, инфицированных AMV, дополнительно внесенные ДНК-специфические последовательности AMV интегрируются тандемно с эндогенным провирусом. Одна копия провирусной ДНК AMV интегрирована рядом с каждой провирусной последовательностью эндогенного провируса (Shoyab et al., 1976).

Каждая интегрированная единица провирусной ДНК AMV эквивалентна примерно одной субъединице 35S РНК в вирионе. Прилегающие провирусные последовательности клеточной ДНК с каждой стороны вновь интегрированного провируса повторяются около 1200 раз на гаплоидный геном клетки.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…