8 июня 2012

Количество неинтегрированной ДНК

Количество неинтегрированной ДНК варьирует, но может составлять более 75% от общего количества вирусспецифической ДНК в недавно инфицированных клетках и от 20 до 70% в полностью трансформированных клетках.

Неинтегрированная вирусная ДНК в любом случае представлена дуплексами с минус-нитями с длиной, соответствующей длине субъединице вирусного генома массой 2,5 — 3,0Х106 и относительно короткими плюс-нитями — 0,5 — 1,0Х106 (Varmus et al., 1976).

В мышиных клетках ЗТЗ (непермиссивная система), инфицированных RSV, вирусспецифическая ДНК синтезируется в течение первых 12 ч, а интеграция начинается через 22 ч после инфекции и полностью заканчивается к 60-му часу.

Общее число интегрированных вирусных геномов равно 2 на одну клетку. В утиных клетках, обработанных этидийбромидом, а затем зараженных RSV не происходит блокирования синтеза вирусспецифической ДНК, т. е. не ингибируется активность обратной транскриптазы. Вместе с тем этидийбромид подавляет интеграцию вирусной ДНК в клеточный геном.

Обнаружено, что ДНК, специфичная для В77 — RSV, синтезируется в 3 — 4 раза эффективнее в опухолевых клетках японских перепелок (QT6, полученных из фибросаркомы, индуцированной метилхолантреном), чем в утиных и перепелиных фибробластах (Ramareddy et al., 1976). В течение первых 5 ч после заражения вирусная ДНК накапливается только в цитоплазме клеток QT6, позднее она появляется и в ядре.

Ковалентнозамкнутая циркулярная форма вирусной ДНК (компонент I) накапливается исключительно в ядре и может персисти-ровать там вплоть до 600 ч после инфекции.

Между 24 и 48 ч компонент I составляет около 50% ядерных видов вирусной ДНК и 20 — 25% вирусной ДНК во всей клетке.

Компонент I представлен тремя типами молекул с массой 6,6Х106, 5,6Х106 и 2-4Х106 (по данным электронной микроскопии).

Вероятно, эти типы молекул транскрибируются с субъединиц РНК полного вируса (3,ЗХ106), с субъединиц РНК td-мутанта (2,8Х106), присутствующего в В77 — RSV. Размер этих видов и их вирусспецифичность подтверждены с помощью молекулярной гибридизации после электрофореза в агаре.

Компонент I с молекулярной массой 5 — 7Х106 оказался инфекционным для куриных эмбриональных клеток, приводя к продукции саркомного и td-мутанта RSV. Вирусная ДНК с молекулярной массой 2 — 4Х106 была неинфекционной и, по-видимому, дефектной.

Инфекция вирусом лейкоза мышей Молони сопровождается также синтезом циркулярной замкнутой формы провирусной ДНК (Gianni et al., 1976). Контурная длина молекул этой ДНК соответствует молекулам с массой 5,5Х106.

Образование гибрида между 35S РНК Мо — MuLV и очищенной циркулярной вирусной ДНК, обнаруживаемое в электронном микроскопе, подтверждает вирусное происхождение этих циркулярных молекул ДНК.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…