Исследования, проведенные в первые 48 ч как на живых клетках с помощью визуального наблюдения и цейтраферной микрокиносъемки, так и на фиксированных и окрашенных тотальных препаратах эксплантатов, показали, что под влиянием больших доз специфических цитотоксических сывороток в клетках эксплантатов семенника и яичника происходят резко выраженные деструктивные изменения. В тех случаях, если исследование проводилось с помощью микрокиносъемки, то в течение 12 ч производилась съемка интактных клеток. Затем, не сдвигая препарат, через боковое отверстие камеры вводилась питательная среда, содержащая специфичную для данных клеток цитотоксическую сыворотку, и вновь производилась съемка этой же группы клеток.
Данные микрокиносъемки показали, что реакция клеток на большую дозу специфичной для них цитотокеической сыворотки наступает уже через несколько минут после контакта с ней клеток. В клетках вначале усиливаются, а затем замедляются токи цитоплазмы, цитоплазматические отростки клетки постепенно втягиваются и все тело клетки округляется, сжимается и уменьшается в объеме.
На тотальных гистологических препаратах эксплантатов, окрашенных гематоксилином Вейгерта, можно было наблюдать изменения как отдельных клеток, так и всей зоны роста. Заметные признаки поражения клеток и нарушение структуры зоны роста наблюдались через 1 ч после начала воздействия сыворотки.
Укорочение отростков и сжимание клеток приводило к тому, что связи между клетками либо полностью нарушались, либо оставались в виде очень тонких цитоплазматических тяжей, на которых держалось сжавшееся и округлившееся тело клетки. Последнее чаще наблюдалось в культурах тканей яичника, где связь между клетками эпителиоидной мембраны выражена сильнее.
Участок зоны роста эксплантата яичника (контроль)
Окраска гематоксилином Вейгерта. Ок. 7 X об. 10.
На рисунке выше представлен участок зоны роста эксплантата яичника из контрольного опыта, а на рисунке ниже — аналогичный эксплантат после воздействия большой дозы АОЦС.
Нарушение структуры зоны роста эксплонтанта яичника после воздействия большой дозы АОЦС
Окраска гематоксилином Вейгерта. Ок.7 х об. 10.
Видна деструкция зоны роста.
В эксплантатах семенника, где зона роста обычно более рыхлая, разрыв межклеточных связей и нарушение правильного взаимного расположения клеток приводили к появлению групп из нескольких слипшихся клеток. Они имели вид конгломератов неправильной формы, в которых не всегда можно было различить отдельные клетки.
Участок зоны роста эксплантата семенника (контроль)
Окраска гематоксилином Вейгерта. Ок.10 X об.20.
На рисунке выше показан общий вид зоны роста контрольного эксплантата семенника, а на рисунке ниже — аналогичный эксплантат после воздействия большой дозы АТЦС.
Вид зоны роста эксплантата семенника через 3 ч после начала воздействия большой дозы АТЦС
Окраска гематоксилином Вейгерта. Ок. 10 X об. 20.
Изменения, наблюдавшиеся в клетках семенника и яичника после воздействия больших доз специфичной для данного вида ткани цитотоксической сыворотки, сводились в основном к следующему: пикноз ядра, вакуолизация цитоплазмы, уменьшение клеток в объеме. В отдельных случаях как при исследовании живых клеток, так и на гистологических препаратах можно было наблюдать на поверхности клетки пузыревидные вздутия.
Пузыре видные вздутия на поверхности клетки эксплантанта
семенника после воздействия большой дозы АТЦС
Окраска гематоксилином Вейгерта. Ок.20 X об.40.
Процесс этот, по нашим наблюдениям на живых клетках, может варьировать у разных клетках одной и той же ткани от одиночных до многочисленных вздутий, захватывающих всю видимую поверхность клетки. В процессе микрокиносъемки мы наблюдали, что в зависимости от интенсивности этого процесса вздутия могут либо исчезнуть и поверхность клетки как бы «успокаивается», либо могут приводить к разрушению оболочки клетки и выходу клеточного содержимого в окружающую среду. Поскольку этот процесс очень непродолжителен и наступает в клетках неодновременно, то его не всегда можно обнаружить.
При электронно-микроскопических исследованиях клеток эксплантатов также наблюдались изменения контуров протоплазматической мембраны клеток.
У клеток контрольных эксплантатов семенника контуры оболочек клеток были, как правило, гладкими, После воздействия большой дозы АТЦС на оболочках клеток, особенно в тех участках, где происходила интенсивная вакуолизация цитоплазмы, обнаруживались выступы самой разнообразной формы. Нередко у основания таких выступов наблюдались ограниченные мембраной вакуоли.
Участок потоплазмической мембраны и эктоплазмической зоны
клетки конторольного эксплантанта семенника
Х 11500.
На рисунке ниже показан участок эктоплазматической зоны и протоплазматической мембраны клетки контрольного эксплантата семенника, а на рис. 10 — аналогичный участок клетки, подвергнутой воздействию большой дозы АТЦС.
Клетка эксплантата семенника через 3 ч после воздействия большой дозы АТЦС
Образование выступов на протоплазматической мембране и вакуолизация цитоплазмы. Х 11 500
Видна интенсивная вакуолизация цитоплазмы и образование выступов на клеточной мембране.
Еще более интенсивное развитие этих образований на клеточной оболочке наблюдалось после воздействия на клетки эксплантатов семенника цитотоксической сыворотки, полученной по отношению к микросомальной фракции клеток семенника.
Участок протоплазматической мембраны клетки эксплантата семенника через 3 ч
после воздействия большой дозы антимикросомальной АТЦС
Х 17 500.
Как известно, при фракционном центрифугировании в этой фракции осаждаются в основном мембранные структуры клетки — обрывки оболочки клетки и мембран эндоплазматического ретикулума, к которым и образуется основная масса антител при использовании этой фракции в качестве антигена для иммунизации животных.
На электронно-микроскопических препаратах клеток эксплантатов семенника после воздействия большой дозы АТЦС обнаруживались изменения всех внутриклеточных структур. Ядра вначале деформируются, приобретая довольно причудливые очертания, а в дальнейшем подвергаются кариопикнозу либо кариолизису.
При пикнозе ядра рассеянные в нуклеоплазме гранулки дезоксирибонуклеопротеида либо собираются в конгломераты и образуют участки электронноплотного вещества, либо располагаются широкой темной полосой вдоль ядерной мембраны. Ядро приобретает вид темного, плотного, неправильной формы образования. При кариолизисе ядра лишены внутреннего содержимого и выглядят оптически пустыми.
«Действие специфических цитотоксических сывороток
на половые железы», под ред. Р.Е.Кавецкого