К 0,2 мл негомолизированной сыворотки добавляют 0,4 мл ацетона, осторожно смешивают стеклянной палочкой, после чего центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Центрифугируют 10 мл мочи и наносят на хроматографическую бумагу («ленинградская медленная») центрифугат без дальнейшей обработки.
На полосу хроматографической бумаги с помощью циркуля наносят окружность диаметром 3 см (диски). На диски наносят микропипеткой 0,05 мл центрифугата, высушивают на воздухе и окрашивают 0,5% раствором нингидрина (полоску бумаги 1 — 2 раза погружают в раствор красителя), после чего полоски бумаги сушат на воздухе 12 — 15 мин, затем помещают на 15 мин в сушильный шкаф при температуре 60 С для выявления окраски. Сравнивают полученную окраску со стандартной шкалой.
Для получения шкалы делают 5 разведений стандартного раствора с концентрацией азота глицина: 19,9; 9,9; 4,9; 2,5 и 1,2 ммоль (28, 14, 7, 3,5 и 1,75 мг%) и проводят с ними все те же манипуляции, что и с центрифугатом.
Полученное окрашивание можно измерить также путем элюции окрашенных дисков. Разрезанные диски помещают в пробирки или сахарные стаканчики, заливают 3 мл этилового спирта и в каждую пробу вводят по 1 капле ледяной уксусной кислоты. Выдерживают 30 мин, после чего фотометрируют на ФЭК при длине волны 500 — 560 нм с зеленым фильтром в кюветах с рабочим расстоянием 0,5 см против контроля. Для контроля элюируют чистый диск. В норме содержание азота аминокислот в крови у новорожденных и детей грудного возраста составляет 5,35 — 6,78 ммоль/л, у более старших детей — 3,21 — 5,35 ммоль/л.
Выделение азота аминокислот с мочой преобладает у детей грудного возраста (4 — 5 мг/кг и более), после года показатели идентичны таковым у взрослых (2 — 2,5 мг/кг).
Для суждения о характере, распространенности и локализации патологического процесса большое значение приобретает определение концентрации отдельных аминокислот в крови и моче.
С этой целью применяют методы разделения аминокислот на фильтровальной бумаге, метод высоко-вольтного электрофореза, хроматографию аминокислот на колонке ионообменных смол, метод газовой хроматографии и др. Предложены комбинированные методы с одновременным использованием электрофореза и хроматографии. Наиболее распространена хроматография по Пасхиной, позволяющая разделить до 17 аминокислот.
Аминокислотный спектр меняется в зависимости от возраста — у новорожденных и у детей в первые месяцы жизни отмечаются высокие показатели экскреции аминокислот (глицин, серии, аспарагин, лизин, гистидин, треонин, пролин и др.). Отношение клиренса аминокислот к клиренсу креатинина у грудных детей равно 1,26 — 5,28, у детей старше 2 лет — 0,96 — 2,44. Представленные данные свидетельствуют о физиологической тубулопатии у детей раннего возраста, что указывает на несовершенство транспортных систем почечных канальцев для аминокислот и о чем следует помнить при диагностике первичных тубулопатии [Вельтищев Ю. Е. и др., 1979].
«Детская урология», Н.А. Лопаткин