При выполнении теста Шелли приходится сталкиваться с рядом трудностей: получение хорошей лейкоцитарной пленки, взятие крови у одного и того же кролика не чаще 1 раза в неделю, нестойкость и склонность базофилов к спонтанной деструкции. В связи с этим в последнее время все шире используют тучные клетки крысы.
Методика
Необходимо получить взвесь тучных клеток. Интактную крысу обезглавливают. Внутрибрюшинно. вводят 5 — 7 мл изотонического раствора хлорида натрия или раствора Тироде, подогретого до 37 °С. Брюшко слегка массируют в течение 15 мин. Затем брюшную полость вскрывают, ее содержимое стекает в пробирку, нагретую до 37 °С и смоченную гепарином. Полученную взвесь, содержащую тучные клетки, необходимо держать в термостате при 37 °С все время исследования.
До начала опыта, который ставится аналогично тесту Шелли, необходимо просмотреть один препарат (взвесь тучных клеток, нанесенную на предварительно окрашенное нейтральным красным предметное стекло). Если в препарате много спонтанно дегранулированных тучных клеток, то тучные клетки этой крысы использовать в опыте нельзя.
Результаты теста определяют так же, как и предыдущего (тест Шелли), по проценту измененных тучных клеток, но просматривают больше клеток (50 — 100). Положительным считается результат больше 10% без деструкции в контроле (0 — 3%).
Тест торможения прямой дегрануляции тучных клеток ставится с тучными клетками предварительно сенсибилизированной крысы. В реакции участвуют сенсибилизированные тучные клетки перитонеальной жидкости крыс, исследуемая сыворотка и аллерген.
Взвесь сенсибилизированных тучных клеток наносят на заранее окрашенное предметное стекло (нейтральный красный), добавляют каплю (0,05 мл) аллергена. Получается прямой тест дегрануляции тучных клеток. Результаты реакции читают через 10 — 15 мин пребывания препарата в термостате. Подсчитывают процент дегранулированных клеток.
Далее на каждое предметное стекло серии наносят одно разведение исследуемой сыворотки, каплю аллергена и каплю сенсибилизированных тучных клеток крысы и так же подсчитывают процент дегранулированных клеток. Результаты сравнивают с данными прямого теста. За титр принимают разведение сыворотки больного, способное тормозить дегрануляцию тучных клеток сенсибилизированного животного.
«Аллергические болезни у детей», проф. М.Я.Студеникин