К принципиально важным вопросам онкоморфологии относятся выявление и определение сходства и отличий нормальных и опухолевых клеток. Это стало возможным только в последние годы благодаря количественной электронной микроскопии, основанной на морфометрическом анализе электронно-микроскопических картин с использованием методов планиметрии и принципов стереологии (Г. Г. Автандилов, 1973).
Установлено, что эргастоплазма и полирибосомный аппарат являются основными цитоплазматическими органеллами белкового синтеза.
Эргастоплазма имеет непосредственное отношение к синтезу высокоспециализированных белковых субстратов, а полирибосомный аппарат ответствен за синтез неспецифических белков, необходимых для роста и размножения клеточной массы. В процессе малигнизации происходит значительная перестройка большинства надмолекулярных систем клетки и в первую очередь белоксинтезирующего аппарата.
Эти данные получены при сравнительном анализе нормальных и опухолевых клеток. Работы же, посвященные изучению структурной перестройки клеток в динамике вирусного канцерогенеза, в доступной литературе отсутствуют.
В связи с этим значительный интерес представляло изучить специфику изменений строения эргастоплазмы и полирибосомного аппарата клетки в динамике вирусного онкогенеза, а также сравнить действия РНК- и ДНК-геномных вирусов на характер изменений указанных органелл, поскольку эти онкогенные агенты имеют различный генетический аппарат и различно взаимодействуют с клеткой.
Естественно, для решения поставленных задач целесообразно применение методов морфометрии, которые значительно объективизируют информацию о тонком строении органелл клетки.
А. С. Ягубов и А. И. Агеенко (1975) использовали первичную культуру фибробластов эмбриона хомяка (ФЭХ).
Эту культуру разделили на три серии. После формирования монослоя клетки инфицировали в одной серии вирусом саркомы Рауса штамм Шмидта—Руппина (1-я серия) и вирусом А12 (2-я серия), 3—6-я серии служили контролем. Исследование производили через 1—2 ч после заражения и далее через 1, 3, 7 сут, на 16-е сутки (начало видимой трансформации) и на 26-е сутки (выраженная морфологическая трансформация).
Для морфометрического анализа отбирали по 30 клеток из каждой серии.
По фотоотпечаткам (методику, смотрите ссылку ниже) определяли следующие морфометрические характеристики: площадь поверхности мембран эргастоплазмы (Sэv), объем эргастоплазмы (Vэv), число рибосом, прикрепленных на единице длины мембран эргастоплазмы (NрэL), коэффициент фрагментации эргастоплазмы (Кэф).
Вычисляли коэффициент уровня морфологической организации эргастоплазмы: Кэ =Sэv*Vэv*NрэL*1/Кэф.
Коэффициент развития полирибосомального аппарата определяли как Kп = Nрпа, т. е. по количеству рибосом, объединенных в полисомы на 1 мк2 цитоплазмы.
Кроме этого, исследовали отношение Кэ/Кп, отражающее соотношение экстра- и интрацеллюлярного белкового синтеза. Все морфометрические параметры и коэффициенты подвергались статистической обработке. Доверительные интервалы средних взяты с надежностью 95%.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко