На рисунке ниже положение — а показана продолжительность митотического цикла культуры ФЭК (непермиссивная система), инфицированной аденовирусом 12-го типа.
Средняя продолжительность митотического цикла, измеренная по кривым меченых митозов, как расстояние между максимумами первой и второй волн, для контрольной культуры составляла 24 ч, для инфицированной — 21 ч; средняя продолжительность G2-фазы для контрольной культуры 5,9 ч, для инфицированной 6 ч, S-фазы 10,6 ч и 8,5 ч, а G1-фазы 6,3 ч и 5,4 ч соответственно.
С помощью колхицинового метода была измерена продолжительность митоза — tm.
Экспериментальные данные обрабатывали по формуле tm= М*t/Мkx , где М — исходный митотический индекс, t — время действия колхицина, Мkx — митотический индекс после действия колхицина в течение времени t.
Для контрольной культуры ФЭК продолжительность митоза составляла 1,2 ч, для инфицированной — 1,1 ч.
На рисунке ниже положение — б изображены кривые меченых митозов контрольной и зараженной вирусом А12 культуры НЕр-2 (пермиссивная система).
Кривые митозов в культуре ФЭК (а) и НЕр-2 (б),
инфицированных аденовирусом типа 12
1 — контроль, 2 — опыт.
По оси абсцисс — время после инкубации с 3Н-тимидином,
по оси ординат — процент митозов от их общего числа.
Первые меченые митозы в контрольной культуре появлялись через 6 ч, а в зараженной — через 3 ч. Продолжительность митотического цикла контрольной культуры НЕр-2 равна 21 ч, а инфицированной вирусом А12 — 18 ч.
Продолжительность G2-фазы не изменилась и для обеих культур составила 8 ч, S-фаза для контрольной культуры равна 9 ч, для инфицированной — 7 ч. Период G1-фазы также сократился при заражении культуры: в контроле 21 — (8 + 9+1) =3 ч, в опыте 18 — (7 + 8+0,8) = 2,2 ч. Продолжительность митоза в контрольной культуре была равна 1 ч, а в инфицированной — 0,8 ч.
Таким образом, в культуре ФЭК, для клеток которой инфекция носит абортивный характер, и в клетках культуры НЕр-2, где вирус размножается и дает литическую инфекцию, в стационарной фазе роста онкогенный аденовирус 12-го типа сокращает продолжительность митотического цикла и его отдельных периодов.
В обоих случаях второй пик меченых митозов был ниже первого.
Уменьшение второго пика является следствием вариабельности G1-фазы. Очевидно, в асинхронной популяции клеток, по-видимому, все клетки проходят клеточный цикл приблизительно с одинаковой скоростью, о чем свидетельствует довольно четко выраженный второй пик меченых митозов как в контрольной, так и в зараженной культурах.
Интересно отметить, что продолжительность G2-фазы существенно не менялась при заражении как культуры ФЭК, так и культуры НЕр-2. Сокращение продолжительности всего цикла обусловлено в основном сокращением G1 и S-фаз. Фаза G1 в различных клеточных системах может иметь разную продолжительность, и клеточный цикл в основном затягивается за счет увеличения продолжительности именно G1-фазы.
Следовательно, можно предположить, что свойство аденовируса 12-го типа как типичного представителя онкогенных вирусов сокращать продолжительность клеточного цикла тесно связано с его способностью ускорять пролиферативные процессы контактноингибированных культур.
Эти ранние нарушения, как и другие патологические сдвиги, возникающие в результате вирусной инфекции, вероятно, не всегда достаточны для опухолевого перерождения клетки, но, по-видимому, необходимы для последующего развития злокачественной трансформации.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко