Анализ многочисленных клеточных линий, трансформированных паповавирусами, показал, что специфика встраивания вирусного генома, обусловливающая трансформацию, обеспечивает, как правило, транскрипцию только ранней области вирусного генома.
Транскрипция интегрированной провирусной ДНК, по-видимому, начинается на клеточном промоторе и контролируется клеточными механизмами. Вместе с тем обнаружено, что импульсивно меченная РНК из клеток, трансформированных SV40, гибридизируется с ДНК SV40, содержащей значительное количество трифосфорилированных 5´-концов, тестируемых в щелочном гидролизате этой РНК как трифосфогуаниновые основания (Georgiev et al., 1976).
Показано, что во фрагменте этой РНК длиной около 100 нуклеотидов также содержатся 5´-три-фосфорилированные концы. Некоторые из них гибридизируются с ДНК SV40. Эти данные дают основания предполагать, что по крайней мере некоторые промоторы SV40 могут использоваться при инициации транскрипции в клетках трансформированных SV40.
Установлено, что РНК-полимераза функционирует на гибридной молекуле с такой же эффективностью, как и на клеточной ДНК, т. е. точки интеграции не являются терминирующими при действии фермента. В ядрах трансформированных клеток синтезируются гигантские молекулы вирусспецифической РНК с массой 1,5 — 10-106, которая в 2 — 3 раза превышает молекулярную массу вирусного генома.
Происходит это за счет того, что транскрипция осуществляется не только с вирусного генома, но и с прилегающих участков клеточного генома. Причем ядра клеток, инфицированных и трансформированных онковирусами, обладают механизмом (неким фактором), специфически разрезающим гигантские молекулы РНК таким образом, что в цитоплазму транспортируются вирусспецифические мРНК, которые содержат только вирусные последовательности.
Поскольку вирусный геном, встроенный в хромосомальную ДНК, имеет двунитевую структуру, принципиально важно выяснить характер транскрипции, т. е. происходит ли при синтезе вирусспецифической РНК асимметричное списывание с одной нити или же симметрично транскрибируются обе нити.
Оказалось, что в клетках, трансформированных паповавирусами, транскрипция ограничена лишь одной минус-Е-нитью, которой в разных клеточных линиях транскрибировалось от 22 до 75%. За редким исключением, весьма незначительная транскрипция осуществлялась и с L-нити (область поздних генов).
Хотя при литической инфекции на ранних стадиях и в трансформированных клетках транскрибируется приблизительно не более 1/3 вирусного генома, все же в трансформированных клетках списывается, вероятно, несколько больший фрагмент минус-Е-нити.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко