При составлении генетических карт онкогенных вариантов аденовирусов использовали те же самые экспериментальные подходы, что и для мелких ДНК-содержащих онковирусов. При действии рестриктазы Е. coli RI на ДНК аденовируса человека 2-го типа образуется 6 фрагментов, последовательность которых в геноме А2 известна. Обнаружено, что ранние мРНК, содержащие поли-А-последовательности, транскрибировались в основном с А-, В- и D-фрагментов ДНК А2. Степень гибридизации с F-фрагментом была крайне низкой.
Поздние мРНК, также несущие поли-А-блоки, транскрибировались в основном с D-, Е- и F-фрагментов. Тотальный препарат ранних мРНК в полиакриламидном геле разделялся на три класса: 26S-, 19 — 20S и 12 — 15S мРНК Эти мРНК гибридизировались соответственно с фрагментами D, В и А ДНК А2. Кроме того, 13S мРНК гибридизировалась с фрагментами D и Е.
Выявлено два вида мРНК класса 13S, один из которых синтезировался только в ранней стадии инфекции, а второй — как в ранний, так и в поздний период, причем транскрипция в этом случае происходила с одного и того же фрагмента ДНК А2. 11S мРНК гибридизировалась с фрагментами А и В.
Гибридизирующаяся с С-фрагментом мРНК была гетерогенной по размерам. При электрофорезе поздних мРНК получены четыре класса мРНК: 27S, 24S, 19S и 11 — 15S. Все они гибридизировались с фрагментами Е и С, a 23S мРНК — с фрагментом F.
Ранняя мРНК комплементарна 25 — 50% легкой и 15% тяжелой нити, и ранняя область ДНК А2 включает последовательности фрагментов легкой нити D, Е и А и тяжелой нити — В, С и, возможно, части А.
Ранние мРНК располагаются на карте ДНК А2 в позициях 0,95; 0,80; 0,03; 0,65 и 0,69 ед. карты (Muwald et al., 1977). Поздняя мРНК содержит последовательности, составляющие 90 — 95% генома А2 (65 — 75% легкой и 15 — 25% тяжелой нити ДНК). Эти последовательности с легкой нити принадлежат фрагментам А, В, С и F и короткому сегменту фрагмента А тяжелой нити.
Аналогичные результаты получены и в экспериментах с вирусом А12 в пермиссивной системе (Smiley, Mak, 1976).
Таким образом, с помощью рестриктирующих эндонуклеаз установлено, что геном аденовирусов имеет совершенно иную организацию, чем генетический аппарат паповавирусов.
В отличие от последних, содержащих только один ранний F-ген, ранние функции аденовирусов кодируются шестью генами, несущими только 22% общего количества генетической информации. Эти гены локализованы в четырех дискретных участках генома, поровну распределенных между комплементарными нитями ДНК. Все эти гены картированы (Levino, 1976).
Обнаружено 10-кратное повышение активности РНК-полимераз II и III в ядрах клеток, продуктивно инфицированных вирусом А2.
Увеличение активности этих ферментов совпадало с усилением синтеза предшественников вирусных мРНК и 5,5S РНК А2 (Weinmann et al., 1976).
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко