Установлено, что репликация ДНК начинается внутри специфического участка на сегменте Н. influenzae С, т. е. в 0,67 ед. карты (в области 0,655 — 0,68 ед.).
Затем синтез идет в обе стороны циркулярной молекулы примерно с одинаковой скоростью и терминируется внутри сегмента Н. influenzae G (0,15 ед. карты).
Для определения участков синтеза ранних и поздних РНК использовали препараты клеточной РНК, выделенной на разных стадиях инфекции (Subramanian et al., 1977). Эту РНК гибридизировали с плюс- и минус-нитями отдельных фрагментов. Оказалось, что ранние гены расположены на фрагментах В (частично I, H) и А (частично) в пределах 0,27 — 0,56 ед. карты на минус-Е-нити. Поздние гены локализованы на фрагментах А (частично), С, D, Е, К, F, J, G и В (частично) на противоположной плюс-L-нити на остальной части генома.
Для фрагментов Н и J, расположенных в середине ранней области транскрипции, получена перекрестная гибридизация с поздними мРНК. Гибридизацией с интактными нитями или фрагментами нитей и избытком денатурированной вирусной ДНК или ДНК трансформированных клеток показана возможность определения уникальных участков вирусного генома.
Транскрибируемые фрагменты как для ранней, так и для поздней РНК непрерывны на генетической карте SV40.
Транскрипция на минус-Е-нити (ранняя матрица) осуществляется от 5´- к З´-концу молекулы в направлении А→Н→I→В, т. е. против часовой стрелки на карте генома SV40, а на плюс-L-нити (поздняя матрица) в противоположном направлении.
Переключение синтеза с одной нити на другую происходит в положениях 55 и 24. Такая ситуация наблюдалась, если для гибридизации использовали полисомальную РНК. Если же для гибридизации применяли тотальную цитоплазматическую РНК, то эта РНК имела молекулы, комплементарные 80 — 85% L-нити и 44% Е-нити ДНК SV40.
Иначе говоря, на поздних этапах может осуществляться симметрическая транскрипция 14 — 20% каждого из четырех фрагментов генома. Сходная картина синтеза имеет место при транскрипции ранних и поздних нитей ДНК в литически зараженных клетках и ядрах инфицированных клеток, импульсно меченных in vitro (Ferdinand et al., 1977).
Эти данные свидетельствуют о том, что элонгация РНК мечеными нуклеотидами in vitro отражает ту частоту списывания, которая характерна для транскрипции L- и Е-нитей, инициируемых in vivo.
Так как РНК, синтезируемые транскрипционным комплексом и хроматином, количественно неотличимы, то, по-видимому, это исключает возможность того, что с интегрированных вирусных последовательностей может транскрибироваться какой-то определенный класс вирусной РНК.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко