Трансформация in vitro, вероятно, так же как и in vivo, осуществляется многоэтапно. Определенный параллелизм прогрессии трансформированных клеток при культивировании и в организме животного позволяет отождествлять некоторые факты, полученные при исследовании процесса неопластического превращения в этих двух системах.
Появление и развитие всех свойств, характерных для бластоматозной клетки, как правило, не коррелируют во времени.
Следовательно, уже в первичнотрансформированных (инфицированных онковирусом) клетках проявляется основной принцип независимости прогрессии отдельных признаков. Такие первичнотрансформированные клетки чаще всего отличаются по своим свойствам как от нормальных, так и от опухолевых клеток.
При исследовании трансформации in vitro можно более четко проследить последовательные стадии опухолевой эволюции клеток, первично контактировавших с онкогенными вирусами.
С помощью метода клонирования удалось установить, что на первой стадии трансформации были только однослойные колонии, при пассировании которых возникали фокусы морфологически измененных клеток с многослойным ростом в монослойной культуре. Обратного перехода не отмечалось.
Опухоли in vivo возникали только при трансплантации клеток из многослойных колоний (Dulbecco, 1976). Вместе с тем разработаны методические приемы для получения ранней трансформации, главным образом под действием онкорнавирусов.
Например, RSV (штамм Шмидта — Руппина) через 14 ч вызывал трансформацию клеток куриного эмбриона и в течение 24 ч трансформировал более 90% инфицированных клеток (Hanabusa, 1970). В этом случае применялся ДЭАЭ-декстран, который резко усиливал прикрепление вируса к клеткам и активировал их размножение после вирусной инфекции.
Одним из важных факторов быстрого изменения культуры явилась синхронность деления клеток. Для выявления морфологических изменений в клетках оказался достаточным один цикл их деления.
При исследовании взаимодействия RSV с клетками млекопитающих установлено, что эффективность проникновения этого вируса довольно высока и в ряде случаев не отличается от таковой для куриных клеток (Ваder, 1972).
Однако эффективность трансформации значительно ниже: лишь 1/25 — 1/500 часть клеток, содержащих вирус, действительно трансформируется. Из таких клеток удается получить ревертанты, морфологически не отличимые от нормальных клеток.
И те и другие клетки содержат геном RSV (доказывается индукцией полного, инфекционного RSV методом искусственных гетерокарионов, создаваемых с помощью инактивированного вируса Сендай).
Трансформированные клетки продуцировали большое количество фокусов, ревертанты — значительно меньше.
Уровень продукции вирусных частиц находился в прямом соотношении с уровнем продукции вируоспецифической РНК.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко