Изложенные выше факты позволяют представить общие начальные этапы процесса репликации онкорнавирусов и трансформации, индуцированной ими. Вирусспецифическая ДНК синтезируется обратной транскриптазой в цитоплазме пермиссивных клеток в течение первых 9 ч инфекции, а в непермиссивной системе синтез продолжается до 12 ч.
Синтез ДНК, направляемый РНК-зависимой ДНК-полимеразой разрушенного RSV, инициируется in vitro путем ковалентного присоединения дезокси-нуклеотидов к 3´-концу РНК-затравки.
Идентифицированы нуклеотиды, участвующие в образовании этой связи, рА и дА. В процессе синтеза ДНК, вероятно, первостепенная роль принадлежит обоим ферментам обратнотранскриптазного комплекса: РНК- и ДНК-зависимым ДНК-полимеразам.
Молекулы синтезированных двуспиральных вирусных ДНК представляют собой линейные формы (или замкнутые циркулярные, у которых могут быть разрывы в отдельных нитях). Их размер соответствует размеру субъединиц вирусного генома (с массой 3Х106). В клетках обнаружены двуспиральные молекулы вирусных ДНК с молекулярной массой 5,5 — 6,6Х106 (Gianni et al., 1976; Ramareddy et al., 1976).
Затем вирусспецифическая ДНК, содержащая практически всю генетическую информацию вирусного генома, мигрирует в ядро, в котором ковалентно связывается с хромосомальной ДНК клетки между 9-м и 24-м часом инфекции (пермиссивная система) и через 22 ч (непермиссивная система).
Предварительно эта ДНК циклизуется, что, вероятно, является необходимым условием для процесса интеграции. Кинетика интеграции ДНК-провируса имеет сходный характер как для трансформирующих, так и для нетрансформирующих онкорнавирусов.
Следовательно, инфекция онкорнавирусами как естественных, так и неприродных хозяев сопровождается интеграцией вирусной ДНК с генетическим аппаратом клетки. В первом случае имеют место как продукция вируса, так и трансформация. Поскольку нормальные клетки птиц и мышей содержат в составе своего генома сегмент (или сегменты), комплементарные вирусному геному, то в этом случае происходит дополнительная интеграция вирусных ДНК-последовательностей.
В случае же неприродных хозяев (вирогенные клетки млекопитающих, зараженные онкорнавирусами птиц) вирусная генетическая информация фиксируется первоначально.
В клетках, инфицированных AMV, дополнительно внесенные ДНК-специфические последовательности AMV интегрируются тандемно с эндогенным провирусом. Одна копия провирусной ДНК AMV интегрирована рядом с каждой провирусной последовательностью эндогенного провируса (Shoyab et al., 1976).
Каждая интегрированная единица провирусной ДНК AMV эквивалентна примерно одной субъединице 35S РНК в вирионе. Прилегающие провирусные последовательности клеточной ДНК с каждой стороны вновь интегрированного провируса повторяются около 1200 раз на гаплоидный геном клетки.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко