Обнаружено, что ревертаза AMV способна транскрибировать вирусный геном в ДНК независимо от того, где локализована затравка три-тРНК или олиго-(дТ), на 5´-конце вирусной РНК или на 3´-конце молекулы (Collett Faras, 1977).
Это означает, что ДНК-транскрипты, инициируемые на три-тРНК-затравке на 5´-конце вирусной РНК, содержат также последовательности, присутствующие и в других частях генома и, возможно, на 3´-конце. Darlix и соавт. (1977) предложили новый метод для прямого анализа обратной транскрипции RSV, который имеет три основных преимущества: транскрипция контролируется in situ в процессе реакции, возможно определение фракции молекул РНК, активных в процессе транскрипции, и, наконец, возможно определение уровня транскрипции внутри популяции молекул РНК.
В результате удалось показать, что синтез ДНК инициируется главным образом на 3 участках субъединицы РНК, один из которых локализован около 5´-конца, а два — около середины молекулы.
Приблизительно 2/3 всех молекул РНК транскрибируется с участка на 5´-конце, эффективность транскрипции с внутренних участков в 2 раза ниже. Основная масса субъединиц РНК RSV является компетентной матрицей только для ограниченной транскрипции на специфических участках.
Для определения размеров вирусной ДНК Varmus и Shank (1976) экстрагировали ее из цитоплазматической фракции, центрифугировали в нейтральном градиенте сахарозы и затем отдельные фракции гибридизировали с вирусной 32Р-РНК.
Установлено, что основная масса минус-нитей ДНК представлена 27 — 30S-компонентом, что соответствует молекулярной массе 2,5 — 3,0X106, т. е. размеру одной субъединицы.
Плюс-нить обнаруживается в зоне 6 — 10S-компонента. Следовательно, вновь синтезированная неинтегрированная вирусная ДНК находится в цитоплазме в виде комплекса, состоящего из полной минус-нити и коротких плюс-нитей.
Структура молекулы и способ включения бромдезоксиуридина в ДНК свидетельствуют о том, что синтез неинтегрированной ДНК осуществляется с матрицы вирионной РНК с помощью обратной транскриптазы.
Из клеток ЗТЗ, зараженных Mo — MSV, выделена вирусспецифическая ДНК, которая к 8-му часу была представлена главным образом линейными молекулами с массой 3,4Х106 (Canaani et al., 1977).
Обнаружены также ковалентно замкнутые кольца и высокомолекулярная (возможно интегрированная) ДНК.
Установлена некоторая степень гибридизации противоположных концов вирусной ДНК с 3´-прилегающим участком вирионной РНК.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко