Индивидуальность тест-объекта приводит к целому ряду затруднений при регистрации его характеристик, интерпретации данных, выявления их соответствия определенным ветвям древа биологических активностей и определения особенностей применения тестируемых ХС в медицине.
Представим некоторые следствия индивидуальности тест-объекта, сказывающиеся на конечных результатах:
| А. Плохая воспроизводимость значений данного параметра (Р) или его изменений | |
| Б. Невоспроизводимость сочетаний значений разных параметров | Г. Измеряемая величина отражает усредненную характеристику гетерогенного ансамбля микрообъектов (клеток), сильно отличающихся от индивидуальных |
| ↓ | |
| В. Трудность учета отличий реакций тест-объекта in vitro от реакций in vivo | ↓ |
| ↓ | |
|
Д. Трудность соотнесения получаемых данных с конкретной индивидуальной ситуацией в клинике (или вообще в природе, так как биоценоз также индивидуален) |
|
Рассмотрим, а точнее, конспективно перечислим те методические подходы преодоления трудностей, которые возможны для каждой ситуации.
Ситуация А:
- стандартизация исходного объекта: стандартизация условий содержания животных, использование контрольных карт состояний (отбраковка животных с картами, для которых отклонения согласно карте превышают определенную величину). То же для культивируемых суспензий. Стандартизация условий получения и культивации тест-объекта;
- выбор наиболее щадящих условий выделения и инкубации тест-объекта;
- использование дополнительных (экстремальных) воздействий, переводящих тест-объект в заданное состояние («прижимание к потолку» биохимических и физиологических возможностей;
- введение безразмерных параметров, нормированных относительно аналогичных параметров нормы.
Ситуация Б:
- введение естественных параметров типа модуля упругости, проницаемости ионов, минимальным образом зависящих от индивидуальности тест-объекта;
- использование полного набора параметров, описывающих свойство. Проведение комплексных измерений (многопараметричность: параметры из разных семейств, отражающие одно и то же свойство);
- достаточно полный охват семейств параметров для выявления реализуемых состояний;
- динамическое определение параметров с коррекцией в ходе эксперимента;
- построение многопараметрического индивидуального образа тест-объекта и его поведения при действии вещества в зависимости от дозы D и времени t: получение совокупности f(D, t), анализ семейства f(D, t) математическими методами.
Ситуация В:
- использование эпиморфного объекта, который in vivo соответствует детальному виду искомой активности (например, лейкозные клетки человека при поиске антилейкозных средств);
- определение возможных (основных) состояний тест-объекта и подходов типа (Б5), оценка их соответствия объекту in vivo. Подбирается одно из состояний тест-объекта, оптимально соответствующее состоянию объекта;
- учет расчетным путем значения и характера влияния различий ситуации in vivo и in vitro. Проведение специальных исследований, выясняющих значение высших уровней регуляции для реакции тест-объекта на ХС (например, межклеточных контактов).
Ситуация Г:
- использование методов препаративной цитологии;
- использование статистических методов с индивидуальным разовым измерением;
- микроскопическая регистрация в динамическом режиме;
- сочетание подходов препаративной цитологии, микроскопических методов в динамическом режиме для работы с максимально гетерогенными объектами.
Ситуация Д:
- определение значимых для терапии данным ХС параметров больного;
- определение общих естественных и существенных для терапии параметров данного больного;
- установление соответствия между особенностями реакции организма человека и закономерностями реакции БТО путем построения многомерных образов и применения теории распознавания образов;
- выбор оптимального БТО на основе знаний о молекулярно-клеточной основе патологии данного больного и о молекулярноклеточном механизме действия лекарственного препарата.
Таким образом, особенности функционирования подсистемы, в которой используются живые БТО, обусловливают определенные требования к измерениям: измерение параметров, непосредственно описывающих характеристику тест-объекта; измерение комплекса параметров, дающих полное описание набора основных характеристик (т. е. определяющих состояние объекта); использование режимов наблюдения с оперативной обратной связью; применение макро- и микроскопических методов наблюдения в динамическом режиме.
Все эти требования следует рассматривать как желательные; их реализация может быть ограничена техническими возможностями и экономической целесообразностью. Например, первое и второе требования могут приводить к слишком сложным и дорогим методам, что делает необходимым поиск компромисса.
Обычно его удается находить на путях гибридизации этой части системы класcификации с обычной исследовательской (экспериментальной) системой, когда в первой представлены более высокопроизводительные и дешевые методы, а трудоемкие и дорогие, полнее удовлетворяющие первому и второму требованиям, работают в обычном исследовательском режиме.
Образуемая за счет такой «гибридизации» комплексная система подобна ступенчатой пирамиде; первую ступень составляют индикаторные методы автоматизированной классификации: они пропускают большой поток веществ, второй, третий этапы работают со все меньшим числом тестируемых ХС, фильтруемых предыдущими ступенями.
«Биологически активные вещества»,
Г.М.Баренбойм, А.Г.Маленков