При определении подлинности экспериментатор ограничен теми данными, которые имеются в регистрационной карте: именно с ними он должен сопоставить свои результаты. При разработке стандарта эти ограничения исчезают. Стандарт создается для каждого ХС как бы впервые.
Стандарт может включать в себя те же показатели, которые используются для определения подлинности (экстремальные характеристики ХС, абсорбционные ИК, УФ-ВД и люминесцентные спектры и т. п.). Однако надежность стандарта может быть улучшена использованием большего числа параметров.
Это увеличение числа параметров может быть проведено несколькими путями:
- варьирование условий измерения. Для таких характеристик ХС, как, например, удельное оптическое вращение, показатель преломления и т. п., целесообразно проводить их измерения при нескольких длинах волн, фактически регистрируя дисперсию;
- варьирование внешней среды для ХС. Электронные спектры — абсорбционные и люминесцентные — сильно зависят от растворителя: применение набора растворителей позволит лучше охарактеризовать вещество. Во многих случаях оптические спектры зависят от pH, флуоресценция зависит от присутствия в растворе молекул-тушителей и т. п. Эти факторы внешней среды разумно варьировать, увеличивая число показателей, зависящих от структуры молекулы;
- увеличение числа параметров за счет использования новых методов, близких по физическим принципам и технике к тем, которые применялись для получения исходной информации о ХС.
Для УФ-ВД-спектров можно регистрировать их поляризацию. В люминесцентном анализе наряду с флуоресценцией можно регистрировать фосфоресценцию, кинетику затухания люминесценции, поляризационные спектры возбуждения и т. п.
При определении подлинности или установлении соответствия образца стандарту возникают две проблемы: разработка методики сравнения показателей и определение критериев, по которым ХС признается неподлинным или несоответствующим стандарту.
Методика сравнения показателей требует, во-первых, параметризации ряда характеристик.
Разумно сравнивать, например, не спектры поглощения и излучения видимого и УФ-света, а такие их параметры (для сплошных спектров), как положение экстремальных точек самого спектра и точек перегиба его первой производной в шкале частот, значение максимума, границы и полуширина определенных спектральных полос и т. п.
Во-вторых, для каждого показателя должна быть определена точность его измерения.
Так, например, при заполнении регистрационных карт плотность сравнительно доступными методами определяется с точностью до четвертого знака после запятой; температура, при которой плотность измерялась, — с точностью до десятой доли градуса, с такой же точностью определяется температура кипения, с точностью до четвертого знака определяется показатель преломления, а длина волны, при которой этот показатель измерен, — с точностью до десятой нанометра и т. п.
«Биологически активные вещества»,
Г.М.Баренбойм, А.Г.Маленков