При наличии в плазме заблокированных фибринмономерных комплексов добавление протаминсульфата приводит к образованию в ней сгустка.
Забор крови производится так же, как и при постановке этанолового теста. Разница лишь заключается в том, что после получения плазмы, богатой тромбоцитами, ее дополнительно центрифугируют при 4000 об/мин в течение 20 мин.
К 0,4 мл плазмы, бедной тромбоцитами, в условиях силиконирования и охлаждения добавляют 0,1 мл 1% раствора протамин-сульфата. Немедленно включают секундомер, содержимое пробирки перемешивают и ставят на водяную баню. Результаты определяют через 15 и 30 мин.
Тест считается положительным, если образуется либо гомогенный сгусток, либо несколько разорванных сгустков.
Протаминсульфатный тест часто (хотя несколько реже, чем этаноловый) бывает положительным при ТГС.
Следует заметить, что эти тесты надо ставить одновременно» так как они дополняют друг друга.
В зависимости от характера реакции (хлопья, нити, сгусток) можно рассчитать концентрацию (приблизительную) продуктов деградации фибриногена и фибрина (Д. М. Зубаиров и сотр. 1983).
Количественный метод определения фибриногена В (В. Г. Патеюк, 1978)
Принцип метода основан на способности фибриногена В (комплекс полных и неполных фибринмономеров, соединенных с ранними и поздними ПДФ) выпадать в осадок под влиянием спиртового раствора бетанафтола.
В пробирку вносят 0,5 мл 1,34% оксалата натрия и из вены без жгута или при очень легком ее пережатии толстой короткой иглой забирают кровь (4,5 мл), которую центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Плазму отсасывают и вносят по 1 мл в 2 пробирки. Затем в 1 пробирку наливают 0,2 мл 50% раствора спирта, в другую — такое же количество 2% раствора бетанафтола, разведенного на 50% спирте (концентрация спирта обязательно контролируется спиртометром).
Обе пробирки оставляют при комнатной температуре на 10 мин. Появление хлопьев во второй пробирке свидетельствует о наличии фибриногена В. По интенсивности выпадения хлопьев оценивается качественная реакция (от 1 + до 4+). После этого пробирки слегка встряхивают и их содержимое фильтруют через заранее взвешенные обеззоленные фильтры, которые высушивают в термостате до постоянного веса. Разница между весом 1-го фильтра до и после фильтрования и высушивания содержимого 1-й пробирки свидетельствует о наличии свернувшихся белков под влиянием спирта и в расчет не принимается. Обычно эта величина невелика. Разница между весом 1-го и 2-го фильтра после высушивания свидетельствует о наличии фибриногена В.
Фибриноген В в норме всегда отсутствует. Наличие его свидетельствует о развитии ТГС.
Определение ранних нитей фибрина (А. Д. Планова, 1971)
При деструкции тканей в цельной крови выявляются ранние нити фибрина, которые в последующем растворяются. Согласно нашим данным, появление ранних нитей фибрина свидетельствует о наличии ТГС.
Первые капли крови, вытекающие из вены, не исследуют, а последующие набирают на часовое стекло. Наблюдение ведется при комнатной температуре в проходящем свете.
Сразу же вдоль капли проводят стеклянным крючочком с загнутым концом, отмечают время появления и исчезновения ранних нитей фибрина, а также образования окончательного фибринового сгустка.
У больных с выраженным ТГС ранние нити фибрина появляются через 20—40 с после взятия крови. У здоровых людей ранние нити фибрина не появляются.
«Кровотечения и тромбозы при оториноларингологических заболеваниях»,
Г.А.Фейгин, Б.И.Кузник