С целью более элективной окраски рекомендуется фиксировать биопсированный кусочек в ацетоне с последующей заливкой в парафин. Биоптат помещают в холодный ацетон на 2 ч (в холодильнике), затем выдерживают в двух порциях 96% этанола (в каждой — сутки), в двух порциях абсолютного спирта (в каждой по 12 ч).
Затем помещают в касторовое или анилиновое масло до просветления ткани, далее в ксилол (по 30 мин в двух порциях). Из ксилола переносят в смесь парафина и ксилола (1:1) и затем, как обычно, заливают в парафин.
Парафиновые срезы из дистиллированной воды помещают в раствор метилового зеленого — пиронина на 20 — 30 мин, затем споласкивают водой и высушивают фильтровальной бумагой, ополаскивают в ацетоне, смеси ацетона и ксилола в равных соотношениях, смеси 3 частей ксилола и 1 части ацетона, далее просветляют в ксилоле и заключают в канадский бальзам.
Приготовление метилового зеленого — пиронина. В делительную воронку помещают 50 мг метилового зеленого, 10 мл дистиллированной воды и 30 мл хлороформа.
Смесь несколько раз встряхивают и сливают осторожно хлороформ, затем его снова наливают, встряхивают, процедуру повторяют 3 раза, пока хлороформ не станет светлым. Последний раз, сливая хлороформ, сливают и немного красителя.
Затем берут 90 мг пиронина, прибавляют 9 мл дистиллированной воды. К 9 мл этого раствора прибавляют 4 мл приготовленного раствора метилового зеленого, затем доливают до 25 мл дистиллированной воды и прибавляют 25 мл ацетатного буфера (рН 4,8). Готовый раствор может находиться в холодильнике длительное время.
Дл выявления в тканях фибрина, что очень важно для диагностики аллергических заболеваний кожи, применяют метод Шуенинова.
«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев