Установлено, что изоформы всех исследованных ферментов и общая активность гексокиназы в цитоплазме интактных клеток ФЭК при культивировании до 24-го дня не изменялись. В ядерной фракции активность гексокиназы 3 была увеличена в течение всех сроков наблюдения, повышена активность ЛДГ1 на 5-й и 24-й дни, а также ЛДГЗ и МДГ1 во все исследованные периоды.
Обнаруженные изменения в интактных клетках, вероятно, связаны с их ростом in vitro.
Изучение этих же ферментов в разных фазах роста нормальной культуры ФЭК показало, что общая активность гексокиназы и ее изоферментов, а также изоферментов ЛДГ в ядре и цитоплазме не изменялась в логарифмической и стационарной фазах. Выявлены изменения активности изоферментов только МДГ. Так, в ядре была увеличена активность МДГ1, в цитоплазме — МДГ2 в поздней стационарной фазе.
Действие инфекционного вируса А6 на культуру ФЭК не вызывало изменений гексокиназы. Изменения изоферментного спектра ЛДГ при внедрении вируса в клетку выражались в подавлении активности ЛДГ1 в ядре, которая в норме была повышена. В цитоплазме культуры исчезала быстро мигрирующая ЛДГ5, активность ЛДГ2 и ЛДГЗ была повышена в 1-й и 3-й дни по сравнению с нормой.
На 18-й день резко снизилась активность ЛДГЗ. На 24-й день инфекции уменьшилась активность ЛДП и увеличилась ЛДГ2, 3 и 4.
Аденовирус 6-го типа способствовал возрастанию активности МДГЗ в ядре и в цитоплазме на 3-й день взаимодействия с вирусом и подавлению МДП, которая была повышена в норме. Следовательно, при действии инфекционного вируса на культуру ФЭК наибольшие сдвиги наблюдались в изоферментном спектре ЛДГ (смотрите рисунки ниже).
В растворимой фракции ядер (а) и цитоплазмы (б) клеток интактной культуры ФЭК (1) и после заражения инфекционным А6 (2) и онкогенным А12 (3) аденовирусами человека. По оси абсцисс — время после заражения вирусом; по оси ординат — активность фермента (мкмоль глюкозы на 1 г белка за 1 мин Х10-2).
Изоферменты ЛДГ (1 — 5) в цитоплазме клеток культуры ФЭК в норме (а)
и при заражении инфекционным аденовирусом человека 6-го типа (б)
По оси абсцисс — время культивирования.
Изоферменты ЛДГ (а) и МДГ (б) в растворимой ядерной фракции
в культуре ФЭК в норме (в) и при заражении вирусом А6
По оси абсцисс — время после инфицирования.
Изоферменты МДГ (1 — 3) в цитоплазме клеток культуры ФЭК в норме (а) и при заражении вирусом А6 (б)
Обнаружено, что в ядерной фракции и в цитоплазме культуры ФЭК, зараженной онкогенным вирусом А12, происходят существенные сдвиги общей активности гексокиназы. Так, в ядерной фракции этот показатель начал изменяться уже на 3-й день контакта вируса А12, с клеткой и резко повысился на 18-й день в ядре — в 2 раза выше нормы (как и в ФЭК, инфицированных аденовирусом 6-го типа).
На 24-й день заражения активность гексокиназы в ядре увеличилась по сравнению с нормой в 31/2 раза (Р<0,1) и в 3,3 раза (Р<, 0,1), чем в ФЭК, зараженных вирусом Аб.
Смотрите рисунок — Активность ГК
В ядре (1 — 3) и цитоплазме (4 — 6) интактной культуры (1, 4) и при заражении инфекционным А6 (2, 5) и онкогенным А12 (3, 6) аденовирусами.
По оси ординат — активность мкмоль глюкозы на 1 г белка за 1 минХ10-2.
В цитоплазме клеток культуры ФЭК общая активность гексокиназы начала повышаться на 5-й день заражения (в 2,6 раза по сравнению с нормой и в 2,2 раза по сравнению с ФЭК, зараженной А6). Этот показатель резко увеличился на 18-й день (в 6,6 раза по сравнению с нормой и в 5,8 раза по сравнению с ФЭК, инфицированной вирусом А6).
На 24-й день заражения онковирусом А12 активность гексокиназы в цитоплазме была почти в 14 раз выше, чем в норме, и в 12 раз выше, чем в ФЭК, зараженной А6.
Смотрите рисунок — Активность ГК
Смотрите рисунок — Активность ПК
Эти данные подтверждают предположение об увеличении потенциальной способности к гликолизу, связанной с малигнизацией клеток (В. С. Шапот, 1975). Отмечено повышение общей активности фермента в цитоплазме по сравнению с активностью в ядерной фракции из клеток культуры, зараженной онковирусом.
В ядерной фракции клеток культуры ФЭК на 5-й, 8-й и 18-й дни после внесения в нее вируса А12 исчезала гексокиназа 1. На 24-й день активность этого изофермента была увеличена в 6 раз по сравнению с нормой. Постепенно повышалась активность и гексокиназы 2, а активность гексокиназы 3 увеличивалась на 8-й и 18-й дни и резко возрастала на 24-й день инфекции.
Электрофореграммы и денситограммы изоферментов ГК (1 — 3) в глобулиновой фракции ядер клеток культуры ФЭК
а — контроль; б, в, г — после инфицирования аденовирусом 12-го типа на 8-й, 18-й и 24-й дни.
В ядерной фракции достоверно повышалась активность ЛДГ1 на 5-й и 18-й дни инфекции, а ЛДГ2 на 8-й и 18-й дни.
Электрофореграммы и денситограммы ферментов ЛДГ
и МДГ в глобулиновой фракция ядер клеток культуры ФЭК
1,5 — контроль; 2 — 4 — изоферменты ЛДГ после заражения вирусом А12 на 5-й, 18-й и 23-й дни;
6 — 10 — изоферменты МДГ после заражения вирусом А12 на 3-й, 5-й, 8-й, 18-й, и 24-й дни.
Динамика изменения активности изоферментов ЛДГ (1 — 6)
и МД1 (4 — 6) в глобулиновой ядерной фракции клеток культуры ФЭК
а — контроль, б — опыт.
По оси ординат — активность (мкмоль глюкозы на 1 г белка за 1 минХ10-2).
Изменения динамики электроподвижности ОЭП изоферментов ЛДГ (1-3)
и МДГ (4-6) в глобулиновой фракции ядер клеток культуры ФЭК
а — контроль; б — опыт.
На 24-й день последний показатель был несколько меньше, чем в норме.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко