В исследованиях последних лет выявлены определенные кинетические закономерности в изменении концентрации свободных радикалов при различных бластоматозных процессах, включая и вирусный канцерогенез (Ю. П. Козлов, 1973; А. И. Агеенко, 1974; Н. М. Эмануэль и др., 1976; Н. М. Эмануэль, 1977).
Установлена прямая корреляция между усилением интенсивности гликолиза и концентрацией свободных радикалов в процессе опухолевого превращения клеток под действием онкогенных аденовирусов (А. И. Агеенко, 1974). Важно отметить, что наблюдаемые патологические нарушения в клетках возникали сразу же при первичном контакте онковируса с клеткой.
Можно предположить, что изменение уровня свободных радикалов в клетках после заражения вирусом А12 связано с перестройкой энергетического обмена, сопровождающей интенсификацию синтетических процессов, а именно синтез клеточной ДНК.
Данный раздел работы, проведенный А. И. Агеенко и И. Я. Коган совместно с Ю. П. Козловым и П. В. Гулак, представляет собой проверку этого предположения путем одновременной регистрации скорости включения 3Н-тимидина в клетки ФЭК (заражение вирусом А12 и контрольные) и уровня свободнорадикальных реакций в них на первых этапах вирусной инфекции.
Результаты измерения радиоактивности клеток, отнесенные к количеству этих клеток в каждой пробе, показали, что включение 3Н-тимидина в клетках как в опыте, так и в контроле является монотонно возрастающей функцией от времени.
Зависимость степени включения 3Н-тимидина (сплошная линия)
и сополимеризации 14С-акриламида (пунктирная линия)
от времени после введения меченых веществ («меток»)
в культуру ФЭК незараженных и зараженных вирусом А12 клеток
По оси абсцисс — время после введения «меток»;
по оси ординат — удельная радиоактивность.
Однако следует отметить, что в зараженных клетках это включение через 24 ч от начала опыта происходило быстрее, чем в контроле. Аналогичный характер имело изменение во времени скорости радикальной сополимеризации 14С-акриламида с компонентами контрольных и пораженных вирусом клеток.
Представляло интерес определить, в какой степени изменение уровня свободнорадикальных реакций сопряжено с динамикой биосинтетических процессов.
Для этого определяли во времени изменения отношения включения 3Н-тимидина к уровню свободнорадикальных реакций, определяемого в каждый момент времени по интенсивности процесса радикальной сополимеризации 14С-акриламида с компонентами клеток.
Оказалось, что начиная с 3 ч после внесения вируса в культуру это отношение является монотонно убывающей функцией от времени.
Изменение со временем от-ношения степени включения 3Н-тимидина
к степени сополимеризации 14С-акриламида в контрольной (1)
и зараженной (2) вирусом А12 культуре ФЭК
По оси абсцисс — время после введения «меток»;
по оси ординат — отношение уровней включения «меток».
Причем для зараженной культуры эта функция со временем изменяется (уменьшается) быстрее, чем в случае неинфицированных клеток.
Полученные данные подтверждают высказанное ранее одним из авторов работы предположение о возможной функциональной зависимости уровня свободнорадикальных реакций в клетке от интенсивности синтеза ДНК.
Вероятно, эта связь может быть опосредована вполне определенными биоэнергетическими процессами, а именно синтезом и распадом макроэргических соединений. На такую возможность косвенно указывает повышение концентрации свободных радикалов в ходе анаэробного гликолиза в культуре ФЭК (А. И. Агеенко, 1974), а также образование свободных радикалов при ферментативном гидролизе АТФ (Ю. П. Козлов, 1973).
Необходимо отметить, что ускорение ассимиляции 3Н-тимидина под влиянием вируса А12 сопровождается увеличением степени сополимеризации 14С-акриламида с компонентами клеток. Как видно из рисунках выше, возрастание скорости сополимеризации 14С-акриламида в клетках зараженной культуры выражено более ярко, чем увеличение степени включения 3Н-тимидина в те же клетки.
Эти данные хорошо согласуются с ранее полученным фактом существенного увеличения концентрации свободных радикалов в культуре ФЭК начиная с 24 ч после заражения вирусом А12 (А. И. Агеенко, 1974).
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко