Изучение посттранскрипционных превращений вирусных мРНК в клетках разных линий, трансформированных SV40, показало, что в тотальном препарате РНК содержатся молекулы, комплементарные ранней нити ДНК SV40 на 22 — 69%, в то время как цитоплазматическая фракция РНК тех же клеток гибридизируется с Е-нитью лишь на 14 — 16% независимо от штамма клеток (Leong et al., 1976).
Во всех исследованных системах поздняя ДНК либо не транскрибировалась вообще, либо, если транскрипция имела место, соответствующие РНК в цитоплазму практически не попадали.
Исключение составили лишь клетки мышей линии SV — ЗТС19, в тотальной и цитоплазматической РНК которых содержались молекулы, несущие 12 и 10% последовательностей поздней ДНК соответственно.
Следовательно, для трансформации клеток достаточно вирусной информации, заключенной во фрагменте ДНК, равном 14 — 16% длины минус-Е-нити ДНК.
В ядре трансформированной клетки синтезируются молекулы вирусной ДНК различной длины, однако переход их в цитоплазму сопряжен с унификацией их по длине и нуклеотидным последовательностям.
Причем количество вирусспецифических мРНК в цитоплазме в несколько раз ниже их содержания в тотальном препарате. В случае вируса полиомы ранняя вирусспецифическая мРНК. в трансформированных клетках транскрибируется с Е-нити с сегмента, локализованного в Е-фрагменте Hpall через начальные 2/3 раннего участка и заканчивающегося в районе В-фрагмента Hpall. Представлены данные, позволяющие предполагать, что и в системе in vivo происходит, по-видимому, асимметричная транскрипция интегрированного вирусного генома.
Вместе с тем экспериментальное обоснование получила и противоположная точка зрения, согласно которой в клетках, продуктивно зараженных SV40 и вирусом полиомы, осуществляется симметрическая транскрипция интегрированной вирусной ДНК- К этому выводу Aloni (1975) пришел на основании следующих экспериментальных данных.
Асимметрическая вирусная РНК, синтезированная in vitro, содержащая все последовательности и эквивалентная одной из нитей ДНК, становится устойчивой к действию панкреатической РНКазы после отжига с денатурированной двунитевой РНК, очищенной из инфицированных клеток.
Величина вирусной двунитевой РНК, определяемая электронно-микроскопически, соответствует размеру гигантской интактной молекулы ДНК SV40.
Молекулы вирусного РНК-предшественника, величина которых сравнима с величиной полного транскрипта генома SV40, обладают высоким уровнем самоотжига. Симметрические РНК-транскрипты затем окончательно «созревают» в ядре.
Вероятно, этот процесс происходит в информосомах, получающийся РНК-продукт имеет коэффициент седиментации 19S. Эти 198-молекулы РНК частично самокомплементарны и содержат сегменты поли-А. В пике 19S находятся РНК, транскрибируемые как с раннего, так и позднего участка ДНК SV40.
Ядерные 19S РНК транспортируются затем в цитоплазму, где часть из них превращается в вирусную 16S РНК, которая является основным компонентом вирусной мРНК, накапливающимся в цитоплазме инфицированных клеток.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко