Количество неинтегрированной ДНК варьирует, но может составлять более 75% от общего количества вирусспецифической ДНК в недавно инфицированных клетках и от 20 до 70% в полностью трансформированных клетках.
Неинтегрированная вирусная ДНК в любом случае представлена дуплексами с минус-нитями с длиной, соответствующей длине субъединице вирусного генома массой 2,5 — 3,0Х106 и относительно короткими плюс-нитями — 0,5 — 1,0Х106 (Varmus et al., 1976).
В мышиных клетках ЗТЗ (непермиссивная система), инфицированных RSV, вирусспецифическая ДНК синтезируется в течение первых 12 ч, а интеграция начинается через 22 ч после инфекции и полностью заканчивается к 60-му часу.
Общее число интегрированных вирусных геномов равно 2 на одну клетку. В утиных клетках, обработанных этидийбромидом, а затем зараженных RSV не происходит блокирования синтеза вирусспецифической ДНК, т. е. не ингибируется активность обратной транскриптазы. Вместе с тем этидийбромид подавляет интеграцию вирусной ДНК в клеточный геном.
Обнаружено, что ДНК, специфичная для В77 — RSV, синтезируется в 3 — 4 раза эффективнее в опухолевых клетках японских перепелок (QT6, полученных из фибросаркомы, индуцированной метилхолантреном), чем в утиных и перепелиных фибробластах (Ramareddy et al., 1976). В течение первых 5 ч после заражения вирусная ДНК накапливается только в цитоплазме клеток QT6, позднее она появляется и в ядре.
Ковалентнозамкнутая циркулярная форма вирусной ДНК (компонент I) накапливается исключительно в ядре и может персисти-ровать там вплоть до 600 ч после инфекции.
Между 24 и 48 ч компонент I составляет около 50% ядерных видов вирусной ДНК и 20 — 25% вирусной ДНК во всей клетке.
Компонент I представлен тремя типами молекул с массой 6,6Х106, 5,6Х106 и 2-4Х106 (по данным электронной микроскопии).
Вероятно, эти типы молекул транскрибируются с субъединиц РНК полного вируса (3,ЗХ106), с субъединиц РНК td-мутанта (2,8Х106), присутствующего в В77 — RSV. Размер этих видов и их вирусспецифичность подтверждены с помощью молекулярной гибридизации после электрофореза в агаре.
Компонент I с молекулярной массой 5 — 7Х106 оказался инфекционным для куриных эмбриональных клеток, приводя к продукции саркомного и td-мутанта RSV. Вирусная ДНК с молекулярной массой 2 — 4Х106 была неинфекционной и, по-видимому, дефектной.
Инфекция вирусом лейкоза мышей Молони сопровождается также синтезом циркулярной замкнутой формы провирусной ДНК (Gianni et al., 1976). Контурная длина молекул этой ДНК соответствует молекулам с массой 5,5Х106.
Образование гибрида между 35S РНК Мо — MuLV и очищенной циркулярной вирусной ДНК, обнаруживаемое в электронном микроскопе, подтверждает вирусное происхождение этих циркулярных молекул ДНК.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко