Фиксации вирусного генома в клеточном

Правомочность предполагаемой схемы первого этапа трансформации (фиксации вирусного генома в клеточном) подтверждается следующими фактами.

1. Синтез вирусной РНК блокируется актиномицином D, при этом синтез белка продолжается как минимум 2 ч и блока в сборке вирионов не происходит.
2. В клетках, зараженных онкорнавирусами, не удалось обнаружить нити РНК, комплементарной вирионной РНК.
3. Осуществляются синтез вирусных ДНК-копий и их функционирование.
4. Инфекция онкорнавирусами сопровождается стимуляцией синтеза клеточной ДНК и активацией ферментов ДНК-комплекса.
5. Ингибиторы синтеза клеточных ДНК, блокирующие матричные функции этих ДНК и синтез ферментов ДНК-комплекса, препятствуют также репликаций онкорнавирусов и опухолевой трансформации, индуцированной ими, в частности, встраиванию вирусной ДНК в клеточную.
6. Вирионы онкорнавирусов содержат все необходимые ферменты, которые могут обеспечивать, с одной стороны, репликацию ДНК, а с другой — рекомбинации, репарации и интеграцию вирусной ДНК с клеточной.
7. В нормальных, пермиссивных клетках почти всех видов птиц методами молекулярной гибридизации выявлено от 1,7 до 4,6 копий вирусного генома, а в нормальных клетках всех высоко- и низкораковых линий мышей — от 9,5 до 13,8 эквивалента вирусной ДНК на клетку. Инфекция и трансформация нормальных куриных клеток RSV приводят к интеграции новых вирусных последовательностей в клеточную ДНК, что тестируется по увеличению количества меченого ДНК-продукта, реассоциирующегося с ДНК из трансформированных клеток. Количество вирусной ДНК в геноме клетки возрастает в 3 — 4 раза. Причем не удалось выявить увеличения числа копий вирусспецифических последовательностей в клетках после трансформации. В нормальных клетках млекопитающих геном онкорнавирусов птиц отсутствует, в вирогенных клетках их количество составляет 2 — 4 генома на клетку.
8. ДНК, изолированные из клеток млекопитающих, трансформированных RSV или другими онкорнавирусами, является инфекционной и индуцирует при внесении в чувствительные клетки образование соответствующего вируса, представляющего собой копию исходного вируса. Аналогичные данные были получены на системах MSV и MuLV (Khoury, Hanafusa, 1976; Var-mus et al„ 1976; Svoboda et al., 1975, 1977).

Интересно, что феномен трансфекции не проявляется, когда используется ДНК из нормальных куриных клеток, в которых тем не менее находится несколько копий вирусного генома. Высокомолекулярная ДНК (с молекулярной массой 60 — 100*10⁶) из крысиных ХС-клеток, трансформированных RSV, также не обладала трансфецирующим действием, но приобретала активность после гидродинамической деградации до фрагментов с молекулярной массой 6 — 10*10⁶. Обработка ДНКазой и термическая денатурация полностью устраняли трансфецирующую активность ДНК ХС-клеток.

Вероятно, ДНК-провирус RSV из ХС-клеток дефектен, так как его экспрессия в реципиентных клетках зависела от gs-антигена, т. е. проявлялась в gs⁺-клетках или в клетках, содержащих chf-фактор (chick cell-associated helper factor).

В то же время ДНК-провирус RSV из вируспродуцирующих клеток, как правило, содержал полную генетическую информацию, экспрессия которой не зависела от chf-фактора и gs-антигена.

Такой ДНК-провирус RSV, внесенный в чувствительные реципиентные клетки, индуцировал их трансформацию и продукцию полного инфекционного вируса (Hill et al., 1975; Svoboda et al., 1975; 1977).

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко