Принципиально важным аспектом проблемы однородности 30 — 40S РНК является их сходство или отличие у трансформирующих и нетрансформирующих фибробласты вирусов, т. е. вирусов сарком и лейкоза.
Наибольший интерес в этом аспекте представляет сравнение следующих групп вирусов птиц и млекопитающих: недефектных вирусов сарком, способных к одновременной трансформации фибробластов in vitro и образованию инфекционного потомства; нетрансформирующих вирусов сарком и вирусов лейкоза, не вызывающих трансформации, но способных к самостоятельной репликации, и, наконец, трансформирующих вирусов сарком млекопитающих, однако реплицирующихся только в присутствии вируса-помощника, т. е. дефектных вирусов.
С помощью электрофореза в полиакриламидном геле в РНК вирусов сарком птиц обнаружены два класса субъединиц «а» и «b», представляющие собой 30 — 40S РНК, отличающиеся по молекулярной массе («а» на 12 — 20% больше «b»).
В РНК вирусов лейкозов и нетрансформирующих вариантах вирусов сарком птиц определялась только субъединица «b». Установлено, что в процессе клонирования трансформирующих вирусов элиминируется РНК «b»-класса.
Присутствие gs-антигена в клетках культуры до заражения не отражается на электрофоретических свойствах вирусных РНК. В клонах вирусов PRC16 и SRA27, образующихся из клонированных колоний, трансформированных вирусом клеток, выявлен дополнительный компонент РНК, который мигрирует при электрофорезе медленнее РНК «а»-класса.
Медленный компонент исчезает после пассажей вируса на первичнотрипсинизированных культурах фибробластов, что указывает на связь его образования с клетками хозяина (Duesberg, Vogt, 1973). Предполагают, что клетки могут модифицировать вирусную РНК.
С помощью метода фингерпринта («отпечатка пальцев») удалось выявить различие в субъединицах «а» и «b»: «а» содержат один или два дополнительных олигонуклеотида, а «b» нет (Lai et al., 1973).
Олигонуклеотидные фингерпринты РНК вирусов птиц различных штаммов и субгрупп значительно отличаются друг от друга.
При перекрестной гибридизации субъединиц «а» и «b» вируса саркомы В77 с ДНК, транскрибированной с РНК нетрансформирующего вируса td-B77, обнаружено, что оба типа РНК («а» и «b») имеют 60% общих и 10% различающихся нуклеотидных последовательностей.
Эти 10% соответствуют молекулярной массе 300 000. Предполагают, что структурное взаимоотношение «а»- и «b»-субъединиц можно выразить формулой а = b + х и все олигонуклеотиды присутствуют только в РНК вирусов сарком, т. е. трансформирующие вирусы содержат в своем геноме дополнительный фрагмент (х).
Следовательно, нельзя исключить, что нуклеотидная последовательность х-фрагмента представляет собой саркомный ген (sarc) и участвует непосредственно в трансформации фибробластов in vitro.
Все штаммы вирусов сарком птиц содержали sarc-специфические последовательности, в то время как в РНК вирусов лейкоза птиц и сарком мышей и в геноме ДНК-содержащих онковирусов этот ген sarc отсутствовал (Stehelin, 1976).
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко