Флуоресцентные ответы ДСМ и АНС в митохондриальных мембранах сходны качественно с их ответами в плазматических мембранах лимфоцитов, но более ярко выражены. Характер флуоресцентных ответов зондов в мембранах лимфоцитов указывает на снижение поверхностного и трансмембранного потенциалов в митохондриальных мембранах.
Наряду с суспензионной тест-системой, которая может быть исследована методами люминесцентного макроанализа или проточной микроспектрофлуорометрии, в качестве тест-системы может быть использована система индивидуальный лимфоцит—ДСМ — АНС при регистрации данных методами люминесцентной микроскопии в стационарном или сканирующем режиме.
В таблице ниже представлены данные, полученные Г. И. Морозовой при флуорометрии митохондриальных областей в отдельных лимфоцитах после воздействия на них димедрола и динитрофенола.
Влияние 2,4-динитрофенола (ДНФ) и димедрола (ДМ) на интенсивность флуоресценции (F) зондов ДСМ и АНС в митохондриях и на изменение трансмембранных потенциалов лимфоцита
| Определяемая характеристика | Зонд, мкМ, | Контроль | 2,4-ДНФ, мМ | ДМ, мМ | |||
| 0,005 | 0,04 | 0,1 | 0,1 | 0,5 | |||
| F/Fmax | АНС, 40 | 1 | 1 | 1 | 2,1±0,6 | 1 | 1,9±0,5 |
| ДСМ, 0,4 | 1 | 0,63±0,05 | 0,003±0,03 | 0,01 | 0,23±0,07 | 0,07 | |
| Δϕ, мВ | ДСМ | 2104±12 | 195±10 | 116±10 | 90±7 | 175±15 | 165±14 |
Примечание. Fmax соответствует F зонда в митохондриях контрольных клеток. Величины Δϕ в присутствии и отсутствии ксенобиотика рассчитаны по уравнениям (21) и (61), представленным в работе Г. И. Морозовой (1984) на основании опытов с насыщением митохондрий зондом ДСМ. Данные, указанные без значений ошибок, ориентировочны (близки к пределу чувствительности флуориметра).
Таким образом, использование флуоресцентного зонда одного ДСМ или совокупно с АНС позволяет качественно и количественно на клеточных суспензиях или индивидуальных живых клетках оценить воздействие ХС на митохондрии.
В зависимости от задачи биологических испытаний и требованиям к точности оценки эти данные могут быть использованы в различных формах. Так, для грубой оценки токсичности ХС можно использовать критерий значительной деэнергизации митохондрий (заметное изменение цвета излучения люминесценции, снижение интенсивности излучения в 10 раз или вообще в n раз).
Измерения могут быть сравнительно легко автоматизированы. Эти данные могут быть очень легко скоррелированы с жизнедеятельностью клетки, если формы проявления этой жизнедеятельности легко фиксируются и могут быть совместимы с регистрацией флуоресценции зондов в клетке. Такая ситуация возможна, например, на подвижных клетках, на клетках развивающегося эмбриона (Морозова, 1984) и т. д.
Конечно, особое значение имеет корреляция этих данных с действием ХС на животных. Традиционный подход для этого — эмпирическая корреляция данных для пары тест-объектов изолированные клетки—животные. Однако люминесцентный анализ позволяет решить эту задачу совершенно оригинальным способом.
«Биологически активные вещества»,
Г.М.Баренбойм, А.Г.Маленков