Распространенным методом для измерения распределения подвижных клеток по скоростям все чаще становятся методы спектроскопии оптического смешения, в которых используется эффект изменения частоты света, рассеянного на подвижном объекте (эффект Доплера). Источником света в этом случае обычно служит лазер. Сравительный обзор различных методов оценки подвижности сперматозоидов выполнен Г. М. Баренбоймом и Л. А. Протозановой (1985).
Для биологических испытаний ХС используются спермии морского ежа, рыбы вьюна, быка и в особых случаях человека (нормальная замороженная сперма доноров или патологическая сперма пациентов, страдающих какими-либо заболеваниями репродуктивной системы).
Весьма удобным лабораторным объектом являются спермии морского ежа и вьюна. Оба эти объекта живут в простых средах (искусственная морская вода для морского ежа и пресная вода для вьюна); вьюн, кроме того, в лабораторных условиях может содержаться без пищи при низких температурах длительное время (несколько месяцев), его сперма активируется, т. е. начинает двигаться только после попадания в пресную воду, что позволяет точно датировать все кинетические эксперименты.
Известно, что спермии животных, даже сильно отличающихся видов, имеют много общего в строении и биохимическом составе.
Поэтому названный набор объектов образует как бы эпиморфный ряд, что позволяет массовые испытания ХС вести на самых доступных из этих объектов — морском еже и вьюне. Рассмотрим некоторые конкретные примеры применения названных тестов и соответствующие алгоритмы, полученные Г. М. Баренбоймом и его сотрудниками.
В одной из работ этой серии в качестве тест-объекта использовались спермии вьюна, регистрация подвижности — фотографическая, с помощью темнопольной микроскопии.
Определялся коэффициент подвижности на первой минуте после активации спермы, предварительно инкубированной с тестируемым ХС. Стандартный коэффициент подвижности К=0,72±0,09. Эффективность оплодотворения при этом близка к 90% и снижается до 40 — 50% при К=0,4 — 0,3. Целый ряд лекарственных препаратов — аминазин (в минимальной концентрации С=10-7М), трифтазин (С=10-7М), оливомицин (С=10-6М) и другие снижали величину К до 0,35 — 0,25, что трактуется как спермотоксичность этих веществ.
В то же время ряд биологически активных соединений кремния (силатраны), активные компоненты экстракта элеутерококка, женьшеня при предварительной инкубации с ними спермиев вьюна стабилизируют тест-объекты, повышают их устойчивость по отношению к повреждающим ХС. На этом же тест-объекте, но с другими ксенобиотиками были проведены исследования Н. А. Барсеговой и др. (1981), где также были обнаружены вещества, снижающие величину коэффициента подвижности или, наоборот, выступающие в качестве протекторов.
Важно отметить, что во всех случаях, когда тестируемые на сперме вьюна ХС испытывались на сперме быка, результаты качественно совпадали.
«Биологически активные вещества»,
Г.М.Баренбойм, А.Г.Маленков