В связи с тем, что линейная зависимость между концентрацией и величиной зон задержки роста тест-микроба обнаруживается лишь в определенной зоне концентраций, растворы стандарта антибиотика должны быть точно подобраны. Для стандарта каждого антибиотика определяют концентрацию раствора, которая обеспечивает образование оптимальных зон задержки роста тест-культуры (контрольная концентрация). Такой концентрацией для пенициллина является 1 ЕД/мл, олеандомицина — 4 ЕД/мл, эритромицина — 1 ЕД/мл и т. д. (смотрите таблицу ниже 8).
Смотрите таблицу — Растворы, применяемые для разведения стандартов и испытуемых образцов, условия приготовления и хранения растворов
В стандартных условиях опыта при применении контрольных концентраций величина зон подавления роста колеблется в пределах 16— 18, 17—19 мм. При приготовлении растворов испытуемого материала стремятся создать концентрации антибиотика в пределах, близких контрольной концентрации стандарта.
Приготовленные разведения стандарта антибиотика и испытуемого материала вносят в стерильные цилиндрики из нержавеющей стали или алюминия, расставленные по 6 в чашке на поверхности застывшей питательной среды. Все цилиндрики должны быть одинакового веса и размера (высотой 10 мл, с внутренним диаметром 6 мм).
Вместо цилиндриков испытуемые растворы можно вносить в предварительно сделанные в толще агара (пробочным сверлом) лунки диаметром 8 мм или пропитывать ими бумажные диски. Однако при использовании дисков иногда получаются зоны неправильной величины и формы, что связано с неравномерной диффузией антибиотика из диска. Растворы стандарта и испытуемого образца вносят в цилиндрики или лунки специальной капельницей или пипеткой в объеме 0,1 мл, чередуя стандартный и испытуемый растворы. Для каждого испытания используют не менее 3 чашек. Чашки инкубируют при 37° в течение 16 ч, затем цилиндрики сбрасывают и измеряют диаметры зон задержки роста тест-микроба, образуемые испытуемыми растворами.
Расчет активности испытуемого препарата
Концентрацию антибиотика в испытуемом субстрате определяют по стандартной кривой. Для построения стандартной кривой используют 5 концентраций стандартного препарата. Одна из концентраций, по которой вносят поправки для всех других, является контрольной. Применяемые для построения кривой концентрации не должны отличаться от контрольной более чем в 2 раза (смотрите ссылку выше).
«Справочник по антибиотикам», С.М.Навашин, И.П.Фомина