Перед началом исследования пробирки с 10 мл расплавленного и охлажденного до 50° того же агара заражают взвесью испытуемых микроорганизмов из расчета 200 млн. микробных тел на 1мл. Зараженный агар выливают в чашки Петри (второй слой), после чего на его застывшую поверхность накладывают индикаторные диски с антибиотиками. Через 3—4 ч инкубации при 37° поверхность чашек заливают 0,2% раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола на дистиллированной воде.
Через несколько минут в местах роста микробов происходит восстановление и обесцвечивание раствора индикатора, зоны подавления роста вокруг дисков с антибиотиками остаются окрашенными в синий цвет. Указанные методы дают возможность судить о степени чувствительности микробов к антибиотикам с той же точностью, что и стандартный метод дисков, однако время исследования сокращается с 16—18 до 3—5 ч.
К ускоренным методам определения чувствительности относится метод, с помощью которого обнаруживается образование инволюционных форм бактерий под действием антибиотика с помощью фазовоконтрастной микроскопии. Инволюционные формы микроорганизмов образуются в присутствии бактериастатических концентраций антибиотика. В отсутствие его, при действии суббактериостатических концентраций, а также при устойчивости изучаемого штамма к препарату вырастают нормальные микроколонии.
Морфологические изменения исследуемых культур под действием антибиотика
Морфологические изменения исследуемых культур под действием антибиотика учитывают в специальных микрокамерах. Техника изготовления микрокамер состоит в следующем: в пробирки с 0,5—1 мл расплавленного МПА добавляют равные объемы того или иного антибиотика в двукратно убывающих концентрациях. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и выливают на поверхность предметных стекол. Полученный таким образом ряд стекол с агаром, содержащим различные концентрации антибиотиков, соответствует ряду чашек Петри или ряду пробирок с убывающими концентрациями антибиотика при методе серийных разведений.
Агар заражают (с помощью тонко оттянутой пастеровской пипетки) взвесью испытуемой культуры и накрывают покровным стеклом. Камеры без парафинизации помещают в термостат при 37° на 3—5 ч. Результаты учитывают по образованию инволюционных форм микробов (при фазовоконтрастном микроскопировании) с установлением концентрации антибиотика, вызвавшей их образование (МПК).
«Справочник по антибиотикам», С.М.Навашин, И.П.Фомина