Сущность метода заключается в дифференцированном изменении красного цвета индикатора (фенолрот) в желтый или фиолетовый в зависимости от чувствительности исследуемого штамма микроорганизма к антибиотику. В случае чувствительности к действию антибиотика штамма возбудителя не происходит сбраживания глюкозы при культивировании на среде, содержащей глюкозу, фенолрот (в качестве индикатора) и определенные концентрации антибиотика.
При этом среда окрашивается в фиолетовый цвет вследствие ее подщелачивания. Изменение красного цвета среды на желтый свидетельствует о расщеплении глюкозы с образованием кислоты в результате роста штамма, устойчивого к действию присутствующего в среде антибиотика. При добавлении к среде культивирования 0,25% дрожжевого экстракта результаты исследования могут быть учтены через 2 ½ ч после его начала.
Использование ускоренных методов
Использование ускоренных методов, относящихся ко второй группе основано на изменении окислительно-восстановительного потенциала питательной среды в процессе роста микроорганизмов, о чем судят по изменению цвета добавляемых к среде индикаторов (резазурин, 1,3,5- трифенилтетразолхлорид, 2,6-дихлорфенолиндофенол и др.). Эти методы отличаются технической простотой, а результаты исследования при их использовании могут быть учтены в течение 2—6 ч. Ход исследования обычно сводится к заражению расплавленного и охлажденного до 50° питательного агара изучаемой культурой (из расчета 200 млн. микробных тел на 1 мл) и размещению на его застывшей поверхности в чашках Петри дисков, пропитанных антибиотиками.
Чашки инкубируют при 37° в течение 3—5 ч, затем обрабатывают индикатором и повторно инкубируют в течение 20—30 мин при 37°. Учет результатов производят по изменению цвета среды вокруг дисков с антибиотиками. Например, при использовании в качестве индикатора 1% раствора 1,3,5-трифенилтетразол-хлорида участки агара с бактериальным ростом вследствие образования формазана окрашиваются в красный цвет, а зоны подавления роста микробов вокруг дисков с антибиотиками остаются бесцветными. При использовании в качестве индикатора 2,6-дихлорфенол индофенол а для исследования применяют двухслойный агар.
Чашки Петри с нижним слоем агара (10—12 мл 1,5% агара на переваре Хоттингера с содержанием 133—135 мг% аминного азота, рН 7,2— 7,4) готовят впрок и хранят в холодильнике до употребления.
«Справочник по антибиотикам», С.М.Навашин, И.П.Фомина