Метод диффузии в агар (метод дисков). При определении чувствительности микробов методом диффузии в агар на поверхность агара, засеянного испытуемыми микробами, помещают диски, пропитанные антибиотиками. Диски вырабатываются из специального картона — ГОСТ 6722-65, диаметром 6 мм. Содержание антибиотика в диске, указанное на этикетке, соответствует рекомендациям ВОЗ.
В стерильные чашки Петри, расположенные на горизонтальной поверхности, разливают по 15 мл плотной питательной среды (перевар Хоттингера с содержанием 110—130 мг% аминного азота). Чашки подсушивают в течение 30 мин при 37° с полуоткрытой крышкой. На поверхность застывшего агара наливают 1 мл 2-миллиардной суспензии испытуемой суточной культуры.
Бактериальную взвесь распределяют на поверхности чашки равномерно, а ее избыток удаляют путем отсасывания пастеровской пипеткой. На поверхность засеянного агара пинцетом раскладывают диски с антибиотиками. Каждая чашка может служить для испытания действия 5—6 антибиотиков. Диски раскладывают на расстоянии 2,5 см от центра чашки. Необходимо плотное прилегание диска к поверхности агара. Затем чашки инкубируют в термостате при 37° в течение 16—18 ч. Результаты учитывают путем изменения зон задержки роста микробов вокруг дисков (включая диаметр самого диска). Отсутствие зоны задержки роста микроба вокруг диска свидетельствует о том, что испытуемый штамм не чувствителен к данному антибиотику, при зоне диаметром до 10 мм штамм расценивается как мало чувствительный. Единичные колонии или тонкая пленка роста внутри зоны задержки роста не учитываются. Размер зон может меняться в зависимости от толщины слоя агара, густоты микробного газона, состава среды. Однако в стандартных условиях опыта по величине зон, образуемых антибиотиком, можно судить о степени чувствительности исследуемого микроба.
При определении чувствительности возбудителей к тетрациклинам (тетрациклин, хлортетрациклин, окситетрациклин) в связи с полной перекрестной устойчивостью микробов к этим антибиотикам можно применять диски лишь с одним препаратом этой группы. В ответе при этом указывают чувствительность (устойчивость) выделенной культуры к тетрациклинам.
Зависимость величины зон от степени чувствительности микроорганизмов
| Степень чувствительности штамма | Диаметр зоны задержки роста в мм |
| Высокочувствительный и чувствительный | 15—25 и более |
| Умеренно чувствительный | 11—15 |
| Устойчивый | Менее 10 или полное отсутствие зон |
«Справочник по антибиотикам», С.М.Навашин, И.П.Фомина