Для определения бактерицидной концентрации из пробирок с отсутствием видимого роста производят посев на агар или бульон. Через 24—48 ч инкубации в термостате отмечают ту наименьшую концентрацию антибиотика в пробирке, посев из которой не дал роста на чашке с агаром.
Для изучения комбинированного действия двух или более антибиотиков также используют метод серийных разведений.
Метод серийных разведений в плотной питательной среде.
Принцип метода тот же, что и при определении чувствительности микробов к антибиотикам в жидкой питательной среде. Готовят серию разведений антибиотика в агаре. Для этого удобно разлить агар во флаконы или в широкие пробирки по 13,5 мл. Перед постановкой опыта агар расплавляют в водяной бане и после охлаждения до 60—65° в каждую пробирку добавляют по 1,5 мл соответствующего разведения антибиотика (в бульоне), тщательно перемешивают и выливают в чашку Петри.
В контрольную пробирку с агаром вместо раствора антибиотика вносят 1,5 мл стерильной дистиллированной воды. Чашку делят на секторы, на каждый из которых засевают испытуемый штамм. Посев делают петлей или пастеровской пипеткой. Для посева часто пользуются также специальным штампов-репликатором, позволяющим нанести по поверхность агара одновременно 25 и более испытуемых культур. Результаты учитывают после 18—24 ч инкубации в термостате при 37°. За минимальную подавляющую концентрацию антибиотика для данного штамма микроорганизма принимают ту, при которой отсутствуют признаки роста на поверхности агара (или не более 5— 10 колоний).
Из двух способов определения чувствительности микробов к антибиотикам (в жидкой и плотной среде) более точным является метод серийных разведений в жидкой среде. Результаты, полученные при определении чувствительности в твердой питательной среде, менее постоянны. Метод разведений в агаре не следует применять для оценки чувствительности микробов, дающих тонкий, разреженный рост (стрептококки, пневмококки) или широко распространяющихся по поверхности агара (протей).
Недостатком метода серийных разведений в жидкой и плотной питательной средах является трудоемкость, что ограничивает его использование в повседневной лабораторной практике. С целью упрощения предложена модификация метода серийных разведений с заменой ряда из 10 пробирок, содержащих различные разведения антибиотика, тремя концентрациями препарата, которые соответствуют максимальной, обнаруживаемой в крови при введении терапевтических доз антибиотика, средней — соответствующей его уровню, наблюдаемому через Т 1/2 (время снижения концентрации антибиотика в крови на 50%), и минимальной, т. е. соответствующей МПК для высокочувствительных штаммов.
В соответствии с используемыми при данной модификации концентрациями антибиотиков изученнные штаммы можно распределить по степени чувствительности на устойчивые (МПК которых превышает значение максимальной концентрации антибиотика в крови), умеренно чувствительные (значения МПК соответствуют максимальной или средней концентрации) и высокочувствительные (чувствительность которых к антибиотику находится на уровне минимальной из использованных концентраций). Такими концентрациями при исследовании чувствительности микробов к бензилпенициллину служат 0,05—0,2; 0,5 и 2 ЕД/ мл, макролидам — 0,1; 0,5—1; 4 мкг/мл, аминогликозидам — 0,5—1; 8—10, 15—20 мкг/мл и т. п.
«Справочник по антибиотикам», С.М.Навашин, И.П.Фомина