Основные растворы должны содержать в 1 мл 1 мг (1000 мкг) антибиотика. Все растворы готовят стерильно. При условии хранения в холодильнике основные растворы стрептомицина, дигидрострептомицина, левомицетина, канамицина сохраняют активность 30 дней, пенициллина — 3 дня, остальных антибиотиков — в течение 1 нед. Для лучшего сохранения и проявления активности рекомендуют растворять антибиотики в буферных смесях.
Из основных растворов каждый раз готовят нужное разведение в зависимости от способа определения чувствительности.
Исходная концентрация антибиотика обычно в 2—8 и более раз (в зависимости от вида микроорганизма) превышает максимальный уровень препарата в крови при его введении в терапевтических дозах.
Метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде. Обычно готовят ряд (8—10 и более) двукратных последовательных разведений антибиотика. Среду разливают по 2 мл в 10 пробирок. В первую пробирку добавляют 2 мл раствора антибиотика определенной концентрации, перемешивают, после чего переносят 2 мл в следующую пробирку, продолжая разведение до предпоследней пробирки, из которой удаляют затем 2 мл. Последняя, десятая, пробирка служит контролем роста культуры. В том же бульоне, который используют для разведения антибиотиков, готовят взвесь суточной агаровой или бульонной культуры испытуемого микроба. Затем к каждой пробирке с разведениями, а также к контрольной,
не содержащей антибиотика, добавляют по 0,2 мл приготовленной взвеси из расчета 10-5 —10-6 микробных тел на 1 мл среды в зависимости от вида микроба. При определении чувствительности к пенициллинам пеницилазопродуцирующих штаммов стафилококка рекомендуют использовать одновременно большую и маленькую микробную нагрузку (100 и 100 000 и выше микробных тел на 1 мл). В зависимости от величины посевной дозы значение минимальной подавляющей концентрации может колебаться: при увеличении дозы чувствительность снижается за счет возрастания количества пенициллиназы в среде.
Пробирки инкубируют при 37° в течение 18—24 ч. Результаты учитывают, определяя наличие или отсутствие роста микроба в среде, содержащей различные разведения антибиотика. Последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон) соответствует минимальной, подавляющей рост испытуемого штамма, концентрации антибиотика и указывает на степень чувствительности микроба. Если среда помутнела во всех пробирках, то испытуемый микроб устойчив к максимально взятой концентрации антибиотика. Отсутствие роста во всех пробирках, кроме контрольной, свидетельствует о том, что чувствительность микроба выше используемой минимальной концентрации.
«Справочник по антибиотикам», С.М.Навашин, И.П.Фомина