Получение антитестикулярной и антиовариальной цитотоксических сывороток и определение их специфичности
В экспериментальных исследованиях использовались АТЦС и АОЦС, специфичные соответственно к ткани семенников и яичников белых крыс. При проведении лабораторно-клинических исследований были использованы аналогичные сыворотки, специфичные к ткани семенников и яичников человека, получившие название «протестикулин» и «прооварин».
Цитотоксические сыворотки для экспериментальных животных получали путем иммунизации кроликов водносолевым экстрактом из ткани семенников или яичников белых крыс. Для иммунизации использовались кролики породы шиншилла в возрасте 2 — 3 лет весом 2,5 — 3 кг.
Используемые для иммунизации семенники и яичники крыс извлекали с соблюдением условий стерильности. Семенник освобождали от наружной белковой оболочки и крупных сосудов, а яичники тщательно очищали от жировой клетчатки и взвешивали на стерильном часовом стекле. Ткани измельчали ножницами, затем растирали в ступке с кварцевым песком, суспендировали в физиологическом растворе и центрифугировали в течение 10 — 15 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость фильтровали через четыре слоя марли и использовали для иммунизации.
Иммунизацию проводили нисходящими дозами антигена.
Для получения АТЦС кроликов иммунизировали экстрактом, приготовленным из 2; 1,5 и 1 г ткани семенника по экспрессному методу Ю. А. Спасокукоцкого (1964), трехкратно с интервалами между инъекциями один день. Для получения АОЦС проводилась пятикратная иммунизация кроликов экстрактами, приготовленными из 300, 250, 200, 150 и 100 мг ткани яичников крыс, с двухдневными интервалами между инъекциями.
На 7-й день после последнего введения антигена у кроликов брали кровь для выявления антител, титр которых определяли в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1 : 160 — 1 : 200 (+ + + +) кроликов обескровливали через a. carotis.
Полученную кровь помещали в термостат на 30 мин при 37°, затем в стерильных условиях отделяли сгусток от стенок пробирки и оставляли пробирки с кровью в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывали, разливали в ампулы и хранили в холодильнике при +4°.
Цитотоксические сыворотки, специфичные к ткани семенников и яичников человека, получали аналогичным методом. Антигенами для получения этих сывороток служили водно-солевые экстракты ткани семенников мужчин или яичников женщин.
Ткани брали от здоровых людей в возрасте 20 — 40 лет, погибших от несчастных случаев. Материал отбирался только при наличии заключения прозекторов.
«Действие специфических цитотоксических сывороток
на половые железы», под ред. Р.Е.Кавецкого
Агарков Г. Б. Нервный аппарат надпочечных желез. М., «Медицина», 1.964. 189 с. Барченко Л. I., Воробей А. I. Порiвняльна серологiчна характеристика антитестикулярноÏ та антимшросомноÏ антитестйкулярноÏ цитотоксичних сироваток. — Фiзiол. журн., 1976, 22, № 5, с. 598 — 603. Бейрах И. С.Рябов М. X. Опыт применения гетерогенных тестикулотоксических сывороток при некоторых функциональных расстройствах мужского полового аппарата….
Нацик В. I. Серолопчна характеристика антитестикулярних цитотоксичних сироваток, специфiчних для бугаш. — Фiзiол. журн., 1974, 20, № 5, с. 628 — 631. Нiщименко О. В. До питания про iмунологiчну активнiсть i специфiчнiсть iмунних цитотоксичних сироваток в реакцiях зв´язування комплемента. — Фiзiол. журн., 1969, 15, № 4, с. 546 — 549. Нiщименко О. В. Характеристика iмунолопчноÏ…
Abramoff P., Saunders J., Gasseling M. Т. Cytotoxicity of geterologous immune chicken serum to normal and neoplastic mouse tissues in culture. — J. Nat. Cancer Instit., 1961, 26, N 3, p. 585 — 599. Anigstein L.} McConnell K., Whitney D., Pappas P., Portman 0., Barnes W. Distribution of radioiodinatid aritiorgan antibodies in the injected rat….
Анализ данных о серологической активности фракции IgG иммуноглобулинов АТЦС в реакции потребления комплемента показал, что она была невысокой. До абсорбции фракции IgM в реакции с тканью семенника связывала 5,9±0,55 единиц комплемента, с другими органами комплементсвязывающая активность их была еще меньше. В реакции с тканью почек связывалось 3,5±0,15 единиц комплемента, с тканью печени — 2,4±0,18, селезенки…
Активность IgM в цитотоксическом тесте была незначительной. Цитотоксический индекс фракции IgM ;с клетками семенника составлял 0,28 ± 0,08. После удаления из сывороток неспецифических антител этот индекс снижался до, 0,13±0,05 (Р < 0,05). В цитотоксической реакции IgM реагировали и с клетками других органов: почек — 0,20 ± 0,04, печени — 0,18 ±0,04, селезенки — 0,19±0,06, легких…
Многочисленными исследованиями установлено отсутствие параллелизма между серологической и цитотоксической активностью сывороток. Оказалось, что сыворотки с высокой серологической активностью слабо эффективны при введении их в организм, и, наоборот, сыворотки, характеризующиеся низким титром антител in vitro, часто обладали значительным цитотоксическим эффектом. По-видимому, эти различия связаны с наличием в сыворотках различных классов иммунных глобулинов и прежде всего IgM…
При постановке перекрестных реакций АТЦС и АТЦС-мс с экстрактом цельной ткани семенника и с митохондриальной фракцией клеток семенника были получены неожиданные результаты. Все испытанные серии АТЦС, за исключением одной, с митохондриальной фракцией клеток семенника реагировали в более высоких титрах, чем с цельной тканью семенника, послужившей антигеном при получении данной сыворотки. При пересчете процентного соотношения титров…
Метод культур тканей был использован рядом авторов для решения вопроса о видовой специфичности цитотоксических сывороток. В опытах Niven (1929) цитотоксическая сыворотка, полученная против тканей эмбриона мыши, оказывала определенное действие только на ткани мыши и более слабое действие — на близкие к ним в видовом отношении ткани крысы. На культуры тканей курицы и морской свинки действие…
При изучении действия малых доз АТЦС и АОЦС для крыс на культуры аналогичных тканей животных другого вида во всех опытах, кроме одного, в котором была обнаружена статистически достоверная стимуляция роста (Р < 0,01), не отмечено влияния цитотоксинов на рост культуры тканей. Смотрите таблицу — Действие малых доз АТЦС и АОЦС, специфичных для крыс, на культуры…
После воздействия больших доз АТЦС и АОЦС на организм половозрелых крыс в гомологичных органах (семенник, яичник) определяются грубые деструктивные изменения, выявляемые до 6 месяцев, в то время как в гетерологичных органах (печень, почки, селезенка) эти изменения кратковременны. Через трое суток после окончания введения сывороток в печени отмечается дискомплексация печеночных балок, мелкокапельная инфильтрация значительного количества клеток….
Была изучена степень сродства АТЦС-мс к экстракту цельной ткани семенника по сравнению с ее сродством к микросомальной фракции клеток семенника и сродство АТЦС к микросомальной фракции клеток семенника по сравнению с ее сродством к экстракту цельной ткани семенника. С этой целью в реакции связывания комплемента учитывался титр сыворотки к обоим видам антигенов. В первой серии…
Существенным моментом в изучении цитотоксических сывороток является установление степени их видовой и органной специфичности относительно ткани — антигена. Под видовой специфичностью цитотоксической сыворотки или специфичностью, ограниченной видом, подразумевают ее свойство вступать во взаимодействие с антигенами ткани только того вида животного, к тканям которого она была получена, и не действовать на аналогичную ткань других видов животных….
