Исследование функции почек по регуляции кислотно-щелочного состояния
Канальцевый аппарат почек (в большей степени дистальные отделы) обладает способностью выделять кислые водородные ионы против концентрационного градиента. Осуществление этого процесса происходит только активным путем с участием ферментов (карбоангидраза, глутаминаза и др.). Образующиеся в результате химических реакций водородные ионы «обмениваются» на ионы натрия, поступающие в соединении с бикарбонатными ионами обратно в кровь (процессы ацидогенеза и аммониогенеза).
Ионы водорода в свою очередь связываются с акцепторами (чаще всего с фосфатами, аммиаком и др.) и в составе слабых органических кислот или кислых солей выводятся с конечной мочой. Таким образом, почки регулярно пополняют организм щелочными эквивалентами и выводят кислые ионы, что способствует поддержанию рН крови в стабильных пределах (у взрослого человека 7,35 — 7,40).
Существует ряд методов для оценки функции почек по регуляции кислотно-щелочного состояния. Наиболее простым является измерение рН мочи индикаторной бумагой, более точно — с помощью рН-метра. Желательно использовать бумагу с широким диапазоном рН — от 4,6 до 7,5 [Вельтищев Ю. Е., Кисляк Н. С, 1979].
Измерение рН мочи с использованием комбинации индикаторов. К 2 мл утренней мочи добавляют 2 капли следующего реактива: 0,06 г метилового оранжевого, 0,2 г бромтимолового синего, 10 мл 0,05 н. раствора NaOH и доводят до 500 мл дистиллированной водой.
После смешивания оценивают окраску:
| рН 4,6 — | оранжевая |
| рН 5,0 — | нежно-розовая |
| рН 5,4 — | розовато-желтая |
| рН 5,8 — | желтая |
| рН 6,2 — | желто-зеленая |
| рН 6,6 — | зеленая |
| рН 7,0 — | зеленовато-синяя |
| рН 7,4 — | сине-зеленая |
Для исследования парциальной функции компенсации метаболического ацидоза у детей в последние годы стали широко использовать нагрузочные пробы, в частности пробу Вронга и Девиса с применением нагрузки хлоридом аммония. Принцип метода заключается в том, что почки в условиях искусственно созданного метаболического ацидоза начинают усиленно экскретировать ионы водорода и аммония. Исследование проводят только в условиях стационара, на фоне стандартной диеты (содержание белка 1 — 1,5 г/кг в сутки, преимущественно растительного происхождения).
Под постоянным контролем стандартных бикарбонатов (SB) в крови нагрузку хлоридом аммония продолжают до тех пор, пока SB не достигнет уровня 16 — 18 ммоль/л, что считают стандартными условиями для проведения пробы. При более высоких показателях SB нагрузку хлоридом аммония продолжают. В детской нефрологической практике применяют длительную нагрузку хлоридом аммония [Сергеева Т. В., 1970].
Методика. Утром натощак берут кровь для определения исходных показателей КЩС. При условии нормального состояния в этот же день обследуемому дают хлорид аммония из расчета 0,2 г/кг в сутки. Указанную нагрузку проводят в течение 3 дней. На 3-й день начинают сбор суточной мочи под слой вазелина (хранят в холодильнике). По окончании нагрузки вновь производят взятие крови для определения кислотно-щелочного состояния на аппарате «микро-Аструп». У здоровых детей до 3 лет стандартные бикарбонаты составляют 18 — 20,5 ммоль/л, старше 3 лет — 21 — 25 ммоль/л. Затем определяют титруемую кислотность мочи и аммиак в моче.
«Детская урология», Н.А. Лопаткин
Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…
Свежевыпущенную мочу центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость и осадок дважды промывают в изотоническом растворе хлорида натрия с фосфатным буфером (рН 7,3). В отмытый осадок добавляют 0,2 мл разведенной 1:5 люминесцирующей кроличьей сыворотки против глобулинов человека. Осадок мочи вместе с сывороткой инкубируют при 37 °С в течение 30 мин, после…
Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….
После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…
Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено. Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в…
