Специальные методы исследования лейкоцитов мочевого осадка
Несмотря на достоинства описанных выше количественных методов подсчета форменных элементов, в частности лейкоцитурии, они не могут дать ответа на вопрос об источнике пиурии. Кроме того, при отсутствии активности воспалительного процесса или в стадии сморщивания почек пиурия может отсутствовать. В связи с этим продолжаются поиски методов, позволяющих выявлять отличительные особенности состава мочи в зависимости от патологии мочевой системы. В настоящее время нашли широкое применение в нефроурологической практике методы суправитальной окраски мочи (метод Штернгеймера — Мальбина) — обнаружение в осадке мочи активных лейкоцитов и морфологическое исследование лейкоцитов.
Морфологическое исследование лейкоцитов мочи. В нашей стране такое исследование впервые было произведено при трансплантации почек [Петровский Б. В. и др., 1969]. Обнаружено, что в осадке мочи преобладают лимфоциты. Р. Falf и М. Flax (1966) при аналогичных состояниях выявили преобладание клеток эпителия канальцев. В детской нефрологии подобные работы впервые проведены В. П. Ситниковой и соав. (1973), которые обнаружили различный лейкоцитарный профиль осадка мочи при гломерулярной и пиелонефритической патологии.
Методика
После тщательного туалета половых органов собирают среднюю порцию утренней мочи. Производят центрифугирование мочи в течение 5 — 10 мин при 1000 — 1500 об/мин. Сливают надосадочную жидкость. К осадку добавляют 2 капли метанола для предотвращения разрушения клеток при высушивании. Небольшое количество осадка наносят на предметное стекло и в центре его осторожно размазывают тонким слоем. Высушенный мазок фиксируют в метаноле несколько минут, после чего окрашивают в течение 5 — 10 мин красителем Гимза. После промывания и высушивания мазка производят микроскопирование (с иммерсией) с подсчетом лейкоцитарной формулы.
При проведении пробы следует соблюдать некоторые условия: плотность мочи должна быть не ниже 1012 — 1014, рН мочи в пределах 5,0 — 6,5, суточная лейкоцитурия не менее 3 000 000. Лейкоцитарная формула определяется при подсчете не менее 100 клеток.
При пиелонефрите в осадке мочи преобладает нейтрофильный профиль лейкоцитурии, при гломерулонефрите — лимфоцитарный, что дает возможность использовать метод в качестве дифференциального теста указанных нефропатий.
«Детская урология», Н.А. Лопаткин
Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….
После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…
Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено. Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в…
Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…
Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…
