14 декабря 2010

Окрашивание толуидиновым синим

Фиксация особенного значения не имеет, срезы можно приготовить на замораживающем микротоме, а также после заливки в парафин. Перед окрашиванием их помещают в изотонический раствор хлорида натрия на 3 ч при температуре 37 °С, затем переносят в 0,5% раствор толуидинового синего на 18 ч.

После этого срезы быстро промывают в трижды сменяемой дистиллированной воде, высушивают фильтровальной бумагой, ополаскивают в 96% этиловом спирте и в смеси равных частей абсолютного спирта и ксилола, просветляют в ксилоле и заключают в канадский бальзам.

Для идентификации гликозаминогликанов необходимо произвести обработку контрольных срезов гиалуронидазой, как указано выше.

Результаты методов окраски следующие

Метод окраски Что выявляется Результат
Гематоксилином и эозином Клеточные элементы и волокнистые структуры Ядра — фиолетовые; коллагеновые волокна, мышцы, нервы — ярко-красные
Ван-Гизона Коллагеновые волокна Коллагеновые волокна — малиновые; ядра, мышцы, нервы, эпителиальные клетки — ярко-желтые
Суданом оранжевым Нейтральные жиры Нейтральный жир — оранжевый
Реакция Перльса Гемосидерин Гемосидерин внутри- и внеклеточный — сине-зеленый
Реакция Косса Отложение солей кальция Соли кальция — черные
Конго красным Амилоид Отложение амилоида — ярко-красные, в поляризационном микроскопе — зеленые
Фута Аргирофильный белок Аргирофильный белок и аргирофильные волокна — черные
ШИК-реакция (метод Мак-Маиуса) Гликоген, нейтральные МПС, грибы Гликоген (диастазолабильпый) — темно-малиновый; нейтральные МПС (диастазорезистентные) —
малиновые, грибы — ярко-малиновые
Толуидиновым синим Гликозаминогликаны Гликозаминогликаны — сиренево-розовые; остальные структуры — голубые
Романовского — Гимзы Тканевые базофилы, гликозаминогликаны, эозинофильные гранулоциты, лейшмании Гранулы тканевых базофилов — метахроматично пурпурные; эозинофильные гранулоциты и лейшмании
— красные
Браше Рибонуклеонротеиды Рибонуклеиновая кислота — красного цвета
Шуенинова Фибрин Отложения фибрина — темно-синие
Грам — Вейгерта Грибы Грибы — темно-фиолетовые
Цпль — Нильсена Кислотоустойчивые микобактерии Микобактерии лепры, туберкулеза — красные

«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев

Читайте далее:



Измельченные кусочки подвергаются предварительной фиксации в 4% глютаральдегиде, забуференном 0,1 М какодилатным буфером (рН 7,3) в течение 2 ч при температуре 4 °С. Хорошие результаты дает также применение 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,3). Затем кусочки промывают в 0,2 М растворе сахарозы па какодилатном буфере в течение 12 ч и фиксируют в течение 2 ч…

Биопсию кожи лучше производить циркулярным полном, который значительно упрощает взятие материала и не травмирует прилежащие участки. Для постановки патологоанатомического диагноза большое значение имеют правильная фиксация и последующая обработка биопсированного кусочка кожи. Лучшим фиксатором для обычных гистологических целей является 10% нейтральный формалин. Его количество должно превышать в 50 раз объем биоптата. Так, биоптат размером 1 X…

Гистохимические методы исследования в основном применяются для научных целей, однако некоторые из них имеют диагностическое значение, как, на пример, ШИК-реакция, окраска альциановым голубым или толуидиновым синим, азаном по методу Гейденгайна и др. С помощью ШИК-реакции выявляют полисахариды: гликоген и муконолисахариды (МПС), особенно нейтральные. Эта реакция необходима для определения ШИК-положительных фибриноида и фибрина. Грибы и хитиновые…

Метод Шифф — йодная кислота применяется для выявления гликогена и нейтральных МПС. Наиболее распространена модификация Хочкисса и МакМануса. Фиксация и способы приготовления срезов различны. Срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор нерйодата натрия или калия (350 мг перйодата калия или натрия + 50 мл дистиллированной воды + 0,5 мл 35% азотной кислоты),…

Срезы, полученные из материала, фиксированного разными способами, помещают в 12% нейтральный формалин на 1 сут, после чего ополаскивают их дистиллированной водой и оставляют в ней на 10 — 15 мин. Затем срезы переносят в раствор перманганата калия (100 мг перманганата калия + 40 мг дистиллированной воды) на 10 мни, хорошо отмывают в нескольких порциях дистиллированной…