14 декабря 2010

Описание метода Пиза

Измельченные кусочки подвергаются предварительной фиксации в 4% глютаральдегиде, забуференном 0,1 М какодилатным буфером (рН 7,3) в течение 2 ч при температуре 4 °С.

Хорошие результаты дает также применение 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,3). Затем кусочки промывают в 0,2 М растворе сахарозы па какодилатном буфере в течение 12 ч и фиксируют в течение 2 ч в осмиевом фиксаторе по Колфилду, по с добавлением 0,02% CaCl2.

Фиксированные кусочки обезвоживают: ополаскивают 50% этиловым спиртом, переносят в 70% спирт на 15 — 20 мин (меняя его 2 раза), затем в 96% этанол на 30 мин, также меняя его 2 раза, и в абсолютный спирт на 1 ч, меняя его 3 раза.

Затем кусочки переносят в окись пропилена на 30 мин, меняя его 2 раза.
Вместо окиси пропилена можно использовать ацетон.

После дегидратации кусочки пропитывают окисью пропилена (или ацетона) и рабочей смесью (1:1) в течение 1 ч, затем в этой же смеси (в соотношении 1:2) от 1 до 3 ч. Далее помещают в рабочую смесь па 12 ч. В состав рабочей смеси входит эпон 812 — 25 мл, аралдит — 15 мл, дюркупан — 2 мл, ДД8А — 55 мл, ДМР 30 — 3 мл.

В качестве заливочной среды можно использовать эпон 812, аралдит, по лучше смесь эпона 812 с аралдитом, которая обеспечивает оптимальные условия готовых блоков в процессе резки на ультратоме. Залитые кусочки в рабочей смеси помещают для полимеризации в термостат при 35 °С на ночь, затем при 49 °С — на день и при 58 °С опять на ночь.

После этого блоки готовы к заточке и резке на ультрамикротоме. Ультратонкие срезы контрастируют насыщенным раствором уранилацетата в 70% спирте в течение 15 мин при температуре 57 °С. Затем срезы контрастируют ацетатом свинца в течение 10 — 15 мин.

«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев

Читайте далее:



Метод Шифф — йодная кислота применяется для выявления гликогена и нейтральных МПС. Наиболее распространена модификация Хочкисса и МакМануса. Фиксация и способы приготовления срезов различны. Срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор нерйодата натрия или калия (350 мг перйодата калия или натрия + 50 мл дистиллированной воды + 0,5 мл 35% азотной кислоты),…

Срезы, полученные из материала, фиксированного разными способами, помещают в 12% нейтральный формалин на 1 сут, после чего ополаскивают их дистиллированной водой и оставляют в ней на 10 — 15 мин. Затем срезы переносят в раствор перманганата калия (100 мг перманганата калия + 40 мг дистиллированной воды) на 10 мни, хорошо отмывают в нескольких порциях дистиллированной…

В 40 мл дистиллированной воды растворяют 80 мг нитрата серебра. К 10 мл раствора прибавляют 8 капель 40% гидроокиси натрия до получения осадка. Затем по каплям продолжают добавлять аммиак до растворения осадка, после чего до 40 доливают дистиллированную воду. Раствор должен быть бесцветным. Окраска азокармином по методу Гейденгайна выявляет белки соединительной ткани и плазмы крови….

0,25% водный раствор азокармина кипятят несколько раз, охлаждают и к 100 мл красителя прибавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты. Анилиновый спирт получают путем добавления к 50 мл 96% спирта 3 капель анилинового масла. Большое диагностическое значение имеют также исследования с помощью поляризационного микроскопа для выявления двоякопреломляющих липидов инородных тел и амилоида. Двоякопреломляющие липиды характерны для…

С целью более элективной окраски рекомендуется фиксировать биопсированный кусочек в ацетоне с последующей заливкой в парафин. Биоптат помещают в холодный ацетон на 2 ч (в холодильнике), затем выдерживают в двух порциях 96% этанола (в каждой — сутки), в двух порциях абсолютного спирта (в каждой по 12 ч). Затем помещают в касторовое или анилиновое масло до…