14 декабря 2010

Окраска по методу Браше

С целью более элективной окраски рекомендуется фиксировать биопсированный кусочек в ацетоне с последующей заливкой в парафин. Биоптат помещают в холодный ацетон на 2 ч (в холодильнике), затем выдерживают в двух порциях 96% этанола (в каждой — сутки), в двух порциях абсолютного спирта (в каждой по 12 ч).

Затем помещают в касторовое или анилиновое масло до просветления ткани, далее в ксилол (по 30 мин в двух порциях). Из ксилола переносят в смесь парафина и ксилола (1:1) и затем, как обычно, заливают в парафин.

Парафиновые срезы из дистиллированной воды помещают в раствор метилового зеленого
— пиронина на 20 — 30 мин, затем споласкивают водой и высушивают фильтровальной бумагой, ополаскивают в ацетоне, смеси ацетона и ксилола в равных соотношениях, смеси 3 частей ксилола и 1 части ацетона, далее просветляют в ксилоле и заключают в канадский бальзам.

Приготовление метилового зеленого — пиронина. В делительную воронку помещают 50 мг метилового зеленого, 10 мл дистиллированной воды и 30 мл хлороформа.

Смесь несколько раз встряхивают и сливают осторожно хлороформ, затем его снова наливают, встряхивают, процедуру повторяют 3 раза, пока хлороформ не станет светлым. Последний раз, сливая хлороформ, сливают и немного красителя.

Затем берут 90 мг пиронина, прибавляют 9 мл дистиллированной воды. К 9 мл этого раствора прибавляют 4 мл приготовленного раствора метилового зеленого, затем доливают до 25 мл дистиллированной воды и прибавляют 25 мл ацетатного буфера (рН 4,8). Готовый раствор может находиться в холодильнике длительное время.

Дл выявления в тканях фибрина, что очень важно для диагностики аллергических заболеваний кожи, применяют метод Шуенинова.

«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев

Читайте далее:



Биопсию кожи лучше производить циркулярным полном, который значительно упрощает взятие материала и не травмирует прилежащие участки. Для постановки патологоанатомического диагноза большое значение имеют правильная фиксация и последующая обработка биопсированного кусочка кожи. Лучшим фиксатором для обычных гистологических целей является 10% нейтральный формалин. Его количество должно превышать в 50 раз объем биоптата. Так, биоптат размером 1 X…

Гистохимические методы исследования в основном применяются для научных целей, однако некоторые из них имеют диагностическое значение, как, на пример, ШИК-реакция, окраска альциановым голубым или толуидиновым синим, азаном по методу Гейденгайна и др. С помощью ШИК-реакции выявляют полисахариды: гликоген и муконолисахариды (МПС), особенно нейтральные. Эта реакция необходима для определения ШИК-положительных фибриноида и фибрина. Грибы и хитиновые…

Метод Шифф — йодная кислота применяется для выявления гликогена и нейтральных МПС. Наиболее распространена модификация Хочкисса и МакМануса. Фиксация и способы приготовления срезов различны. Срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор нерйодата натрия или калия (350 мг перйодата калия или натрия + 50 мл дистиллированной воды + 0,5 мл 35% азотной кислоты),…

Срезы, полученные из материала, фиксированного разными способами, помещают в 12% нейтральный формалин на 1 сут, после чего ополаскивают их дистиллированной водой и оставляют в ней на 10 — 15 мин. Затем срезы переносят в раствор перманганата калия (100 мг перманганата калия + 40 мг дистиллированной воды) на 10 мни, хорошо отмывают в нескольких порциях дистиллированной…

В 40 мл дистиллированной воды растворяют 80 мг нитрата серебра. К 10 мл раствора прибавляют 8 капель 40% гидроокиси натрия до получения осадка. Затем по каплям продолжают добавлять аммиак до растворения осадка, после чего до 40 доливают дистиллированную воду. Раствор должен быть бесцветным. Окраска азокармином по методу Гейденгайна выявляет белки соединительной ткани и плазмы крови….