1 августа 2012

Радикальная со полимеризация 14С-акриламида с компонентами клеток и включение 3Н-тимидина в культуре крысиных фибробластов при аденовирусной инфекции

В исследованиях последних лет выявлены определенные кинетические закономерности в изменении концентрации свободных радикалов при различных бластоматозных процессах, включая и вирусный канцерогенез (Ю. П. Козлов, 1973; А. И. Агеенко, 1974; Н. М. Эмануэль и др., 1976; Н. М. Эмануэль, 1977).

Установлена прямая корреляция между усилением интенсивности гликолиза и концентрацией свободных радикалов в процессе опухолевого превращения клеток под действием онкогенных аденовирусов (А. И. Агеенко, 1974). Важно отметить, что наблюдаемые патологические нарушения в клетках возникали сразу же при первичном контакте онковируса с клеткой.

Можно предположить, что изменение уровня свободных радикалов в клетках после заражения вирусом А12 связано с перестройкой энергетического обмена, сопровождающей интенсификацию синтетических процессов, а именно синтез клеточной ДНК.

Данный раздел работы, проведенный А. И. Агеенко и И. Я. Коган совместно с Ю. П. Козловым и П. В. Гулак, представляет собой проверку этого предположения путем одновременной регистрации скорости включения 3Н-тимидина в клетки ФЭК (заражение вирусом А12 и контрольные) и уровня свободнорадикальных реакций в них на первых этапах вирусной инфекции.

Результаты измерения радиоактивности клеток, отнесенные к количеству этих клеток в каждой пробе, показали, что включение 3Н-тимидина в клетках как в опыте, так и в контроле является монотонно возрастающей функцией от времени.


Зависимость степени включения 3Н-тимидина (сплошная линия)
и сополимеризации 14С-акриламида (пунктирная линия)
от времени после введения меченых веществ («меток»)
в культуру ФЭК незараженных и зараженных вирусом А12 клеток

Зависимость степени включения 3Н-тимидина (сплошная линия) и сополимеризации 14С-акриламида (пунктирная линия) от времени после введения меченых веществ («меток») в культуру ФЭК незараженных и зараженных вирусом А12 клеток

По оси абсцисс — время после введения «меток»;
по оси ординат — удельная радиоактивность.


Однако следует отметить, что в зараженных клетках это включение через 24 ч от начала опыта происходило быстрее, чем в контроле. Аналогичный характер имело изменение во времени скорости радикальной сополимеризации 14С-акриламида с компонентами контрольных и пораженных вирусом клеток.

Представляло интерес определить, в какой степени изменение уровня свободнорадикальных реакций сопряжено с динамикой биосинтетических процессов.

Для этого определяли во времени изменения отношения включения 3Н-тимидина к уровню свободнорадикальных реакций, определяемого в каждый момент времени по интенсивности процесса радикальной сополимеризации 14С-акриламида с компонентами клеток.

Оказалось, что начиная с 3 ч после внесения вируса в культуру это отношение является монотонно убывающей функцией от времени.


 Изменение со временем от-ношения степени включения 3Н-тимидина
к степени сополимеризации 14С-акриламида в контрольной (1)
и зараженной (2) вирусом А12 культуре ФЭК

Изменение со временем от-ношения степени включения 3Н-тимидина к степени сополимеризации 14С-акриламида в контрольной (1) и зараженной (2) вирусом А12 культуре ФЭК

По оси абсцисс — время после введения «меток»;
по оси ординат — отношение уровней включения «меток».


 

Причем для зараженной культуры эта функция со временем изменяется (уменьшается) быстрее, чем в случае неинфицированных клеток.

Полученные данные подтверждают высказанное ранее одним из авторов работы предположение о возможной функциональной зависимости уровня свободнорадикальных реакций в клетке от интенсивности синтеза ДНК.

Вероятно, эта связь может быть опосредована вполне определенными биоэнергетическими процессами, а именно синтезом и распадом макроэргических соединений. На такую возможность косвенно указывает повышение концентрации свободных радикалов в ходе анаэробного гликолиза в культуре ФЭК (А. И. Агеенко, 1974), а также образование свободных радикалов при ферментативном гидролизе АТФ (Ю. П. Козлов, 1973).

Необходимо отметить, что ускорение ассимиляции 3Н-тимидина под влиянием вируса А12 сопровождается увеличением степени сополимеризации 14С-акриламида с компонентами клеток. Как видно из рисунках выше, возрастание скорости сополимеризации 14С-акриламида в клетках зараженной культуры выражено более ярко, чем увеличение степени включения 3Н-тимидина в те же клетки.

Эти данные хорошо согласуются с ранее полученным фактом существенного увеличения концентрации свободных радикалов в культуре ФЭК начиная с 24 ч после заражения вирусом А12 (А. И. Агеенко, 1974).

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Результаты, полученные при количественном исследовании тонкого строения клеток ФЭХ

Анализируя результаты, полученные при количественном исследовании тонкого строения клеток ФЭХ при действии вируса А12, можно отметить, что показатель Кэ, характеризующий степень развития эргастоплазмы, значительно снижается, особенно начиная с 7-го дня после инфицирования, и к сроку выраженной трансформации достигает предельно низких величин. Динамика изменения показателя Кэ в процессе трансформации культуры ФЭХ вирусами А12 и RSV 1…

Особое значение для оценки сдвигов, происходящих в энергетическом обмене на ранних этапах трансформации, детерминированной онковирусом, приобретает анализ структурной перестройки митохондрий, осуществляемый параллельно с определением функциональных изменений, полученных на этой же системе и в те же сроки с помощью биохимических методов. Сведения о подобных исследованиях в литературе отсутствуют. А. И. Агеенко, А. С. Ягубов и Ю….

К принципиально важным вопросам онкоморфологии относятся выявление и определение сходства и отличий нормальных и опухолевых клеток. Это стало возможным только в последние годы благодаря количественной электронной микроскопии, основанной на морфометрическом анализе электронно-микроскопических картин с использованием методов планиметрии и принципов стереологии (Г. Г. Автандилов, 1973). Установлено, что эргастоплазма и полирибосомный аппарат являются основными цитоплазматическими органеллами белкового…

Преобладание медленно движущихся (катодных) фракций ЛДГ4 и ЛДГ5 при снижении уровня быстро движущихся (анодных) ЛДГ1 и ЛДГ2 обнаружено в тканях, адаптированных к гипоксии и ацидозу, в которых основным источником энергии является гликолиз. В то же время можно считать доказанным, что удельный вес гликолиза в клетках злокачественных новообразований повышается (В. С. Шапот, 1975). Установлено, что скорость…

Показано, что повышение процента ЛДГ4 и ЛДГ5, а также снижение содержания ЛДГ1 и ЛДГ2 наблюдались в тканях у большей части обследованных больных (Р<0,001), не только в гомогенатах злокачественных опухолей, но и в тканях полипов прямой и ободочной кишки. При этом отсутствие увеличения содержания ЛДГ5 в опухоли при раке выявлено только в 8,7% случаев (в 17…