26 июля 2012

Митотический цикл культуры клеток, зараженных вирусом А12

На рисунке ниже положение — а показана продолжительность митотического цикла культуры ФЭК (непермиссивная система), инфицированной аденовирусом 12-го типа.

Средняя продолжительность митотического цикла, измеренная по кривым меченых митозов, как расстояние между максимумами первой и второй волн, для контрольной культуры составляла 24 ч, для инфицированной — 21 ч; средняя продолжительность G2-фазы для контрольной культуры 5,9 ч, для инфицированной 6 ч, S-фазы 10,6 ч и 8,5 ч, а G1-фазы 6,3 ч и 5,4 ч соответственно.

С помощью колхицинового метода была измерена продолжительность митоза — tm.

Экспериментальные данные обрабатывали по формуле tm= М*t/Мkx , где М — исходный митотический индекс, t — время действия колхицина, Мkx — митотический индекс после действия колхицина в течение времени t.

Для контрольной культуры ФЭК продолжительность митоза составляла 1,2 ч, для инфицированной — 1,1 ч.

На рисунке ниже положение — б изображены кривые меченых митозов контрольной и зараженной вирусом А12 культуры НЕр-2 (пермиссивная система).


Кривые митозов в культуре ФЭК (а) и НЕр-2 (б),
инфицированных аденовирусом типа 12

Кривые митозов в культуре ФЭК (а) и НЕр-2 (б), инфицированных аденовирусом типа 12

1 — контроль, 2 — опыт.
По оси абсцисс — время после инкубации с 3Н-тимидином,
по оси ординат — процент митозов от их общего числа.


Первые меченые митозы в контрольной культуре появлялись через 6 ч, а в зараженной — через 3 ч. Продолжительность митотического цикла контрольной культуры НЕр-2 равна 21 ч, а инфицированной вирусом А12 — 18 ч.

Продолжительность G2-фазы не изменилась и для обеих культур составила 8 ч, S-фаза для контрольной культуры равна 9 ч, для инфицированной — 7 ч. Период G1-фазы также сократился при заражении культуры: в контроле 21 — (8 + 9+1) =3 ч, в опыте 18 — (7 + 8+0,8) = 2,2 ч. Продолжительность митоза в контрольной культуре была равна 1 ч, а в инфицированной — 0,8 ч.

Таким образом, в культуре ФЭК, для клеток которой инфекция носит абортивный характер, и в клетках культуры НЕр-2, где вирус размножается и дает литическую инфекцию, в стационарной фазе роста онкогенный аденовирус 12-го типа сокращает продолжительность митотического цикла и его отдельных периодов.

В обоих случаях второй пик меченых митозов был ниже первого.

Уменьшение второго пика является следствием вариабельности G1-фазы. Очевидно, в асинхронной популяции клеток, по-видимому, все клетки проходят клеточный цикл приблизительно с одинаковой скоростью, о чем свидетельствует довольно четко выраженный второй пик меченых митозов как в контрольной, так и в зараженной культурах.

Интересно отметить, что продолжительность G2-фазы существенно не менялась при заражении как культуры ФЭК, так и культуры НЕр-2. Сокращение продолжительности всего цикла обусловлено в основном сокращением G1 и S-фаз. Фаза G1 в различных клеточных системах может иметь разную продолжительность, и клеточный цикл в основном затягивается за счет увеличения продолжительности именно G1-фазы.

Следовательно, можно предположить, что свойство аденовируса 12-го типа как типичного представителя онкогенных вирусов сокращать продолжительность клеточного цикла тесно связано с его способностью ускорять пролиферативные процессы контактноингибированных культур.

Эти ранние нарушения, как и другие патологические сдвиги, возникающие в результате вирусной инфекции, вероятно, не всегда достаточны для опухолевого перерождения клетки, но, по-видимому, необходимы для последующего развития злокачественной трансформации.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Результаты, полученные при количественном исследовании тонкого строения клеток ФЭХ

Анализируя результаты, полученные при количественном исследовании тонкого строения клеток ФЭХ при действии вируса А12, можно отметить, что показатель Кэ, характеризующий степень развития эргастоплазмы, значительно снижается, особенно начиная с 7-го дня после инфицирования, и к сроку выраженной трансформации достигает предельно низких величин. Динамика изменения показателя Кэ в процессе трансформации культуры ФЭХ вирусами А12 и RSV 1…

Особое значение для оценки сдвигов, происходящих в энергетическом обмене на ранних этапах трансформации, детерминированной онковирусом, приобретает анализ структурной перестройки митохондрий, осуществляемый параллельно с определением функциональных изменений, полученных на этой же системе и в те же сроки с помощью биохимических методов. Сведения о подобных исследованиях в литературе отсутствуют. А. И. Агеенко, А. С. Ягубов и Ю….

К принципиально важным вопросам онкоморфологии относятся выявление и определение сходства и отличий нормальных и опухолевых клеток. Это стало возможным только в последние годы благодаря количественной электронной микроскопии, основанной на морфометрическом анализе электронно-микроскопических картин с использованием методов планиметрии и принципов стереологии (Г. Г. Автандилов, 1973). Установлено, что эргастоплазма и полирибосомный аппарат являются основными цитоплазматическими органеллами белкового…

Преобладание медленно движущихся (катодных) фракций ЛДГ4 и ЛДГ5 при снижении уровня быстро движущихся (анодных) ЛДГ1 и ЛДГ2 обнаружено в тканях, адаптированных к гипоксии и ацидозу, в которых основным источником энергии является гликолиз. В то же время можно считать доказанным, что удельный вес гликолиза в клетках злокачественных новообразований повышается (В. С. Шапот, 1975). Установлено, что скорость…

Показано, что повышение процента ЛДГ4 и ЛДГ5, а также снижение содержания ЛДГ1 и ЛДГ2 наблюдались в тканях у большей части обследованных больных (Р<0,001), не только в гомогенатах злокачественных опухолей, но и в тканях полипов прямой и ободочной кишки. При этом отсутствие увеличения содержания ЛДГ5 в опухоли при раке выявлено только в 8,7% случаев (в 17…