24 июля 2012

Эксперименты А. И. Агеенко

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно.

Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса.

Из первичноиндуцированных сарком вирус А12 был выделен только в одном из 10 случаев. В то же время из сарком А12 ММЛ (две перевивные линии сарком, полученные из микроскопических метастазов в легкое клеток сарком А12 путем подкожной трансплантации водно-солевой суспензии ткани легкого) аденовирус выделить не удалось ни методом, описанным выше, ни после физических и химических воздействий на опухолевые клетки.

Затем исследовали уровень вируснейтрализующих антител и антител к Т-антигену в сыворотках крови хомяков — носителей сарком. Оказалось, что с помощью реакции связывания комплемента определяются антитела к аденовирусу 12-го типа в сыворотках хомяков с первичноиндуцированными саркомами (в 15 из 20 сывороток в разведении 1 : 64 и выше).

Этот факт можно объяснить тем, что инфекционный вирус вводился хомякам 2 раза. В то же время и в сыворотках крови хомяков с перевивными саркомами А12 выявлялись вируснейтрализующие антитела при разведении 1 : 32, хотя этим животным аденовирус не вводили. В сыворотках хомяков с перевивными саркомами А12 ММЛ антитела были обнаружены в 3 из 10 случаев, у здоровых животных — только в одном случае. Большинство сывороток носителей опухолей содержали антитела к Т-антигену. В 3 сыворотках животных с опухолями А12 ММЛ обнаружены антитела к Т-антигену, приготовленному только из первичноиндуцированных и перевивных сарком А12; клетки сарком А12 ММЛ содержат небольшое количество Т-антигена, и он выявлялся только в тесте иммунофлюоресценции.

Интересно отметить, что с помощью непрямой иммунофлюоресценции в почечных клетках животных — носителей сарком А12 в 60% случаев выявлено четкое свечение ядерных и цитоплазматических Т-антигенов. Вирус А12 постоянно продуцируется частью клеток из перевивных сарком и, попадая в кровоток, вызывает ответную реакцию опухоленосителя в виде антителообразования и индукции в некоторых органах (почки) Т-антигенов. Следовательно, наличие в крови хомяков с опухолями антител к аденовирусу также свидетельствует о том, что по крайней мере некоторые из этих опухолей являются вирогенными.

Особого внимания заслуживают эксперименты на клетках саркомы А12 ММЛ. Хотя из этих опухолей интактный вирус не был выделен, но наличие вирусного генома подтверждалось синтезом Т-антигенов в клетках всех опухолей и наличием вирусных и Т-антител в сыворотках крови некоторых животных.

Поверхностные мембраны клеток этих опухолей не давали специфического свечения. Вероятно, полученные факты объясняют в какой-то степени процесс метастазирования, для которого отбираются только клетки, несущие слабые поверхностные антигены (или их не имеющие).


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…

Изучение посттранскрипционных превращений вирусных мРНК в клетках разных линий, трансформированных SV40, показало, что в тотальном препарате РНК содержатся молекулы, комплементарные ранней нити ДНК SV40 на 22 — 69%, в то время как цитоплазматическая фракция РНК тех же клеток гибридизируется с Е-нитью лишь на 14 — 16% независимо от штамма клеток (Leong et al., 1976). Во…