19 июля 2012

Взаимоотношение онковируса с трансформированной клеткой

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток.

  1. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам.
  2. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной» клеткой, в которой вирус может закончить полный инфекционный цикл). В некоторых случаях осуществляют перенос клеточной ДНК из трансформированных клеток (феномен трансфекции) в чувствительные культуры. Эффективными активаторами вирусных геномов служат специальные обработки вирогенных клеток различными канцерогенами и мутагенами. Иногда успешно применяют такие воздействия, как усиленное питание трансформированных клеток или, наоборот, искусственное голодание, суперинфицирование их другими вирусами или использование симпластообразующей способности инактивированного вируса Сендай.
  3. Вируснепродуцирующие, «безвирусные», и «безантигенные» опухолевые клетки, в которых наличие вирусных генов (провирусного генетического материала) можно определить только с помощью биохимических методов. Активировать геном вируса в таких клетках пока удавалось очень редко (и в минимальном проценте).

Последний тип отношений может быть обусловлен несколькими причинами.

Во-первых, весьма вероятно, что в геноме трансформированной клетки при этом варианте присутствует неполный геном вируса, т. е. с клеточной ДНК интегрирована только часть вирусной ДНК, достаточная для того, чтобы вызвать трансформацию, но не содержащая информации для репликации некоторых вирусных компонентов.

Клетки такого типа, т. е. содержащие неполный вирусный геном, предложено называть «криптовирогенными».

Примером могут служить линии мышиных клеток (RVA4 и RVP3), трансформированные RSV.

В клетках RVA4 даже методом гибридизации 3Н-РНК RSV с клеточной ДНК не удалось обнаружить геном RSV или его фрагменты, хотя клетки имели трансформированный фенотип и в них идентифицирован TSTA-антиген, специфичный для онковирусов птиц (Svoboda et al., 1977).

Во-вторых, при наличии даже полного вирусного генома некоторые его функции могли быть блокированы более полно, чем в других системах.

Нельзя также исключить, что для некоторых невирогенных опухолевых клеток еще не найдены адекватные условия и метод индукции репрессивного генома онкогенного вируса. В большинстве же исследованных клеточных линий, не продуцировавших инфекционный вирус и в которых частицы вируса не определялись при электронной микроскопии (на протяжении сотен и более пассажей), методом контактной индукции или с помощью искусственного слияния трансформированных клеток с индикаторными культурами при использовании парагриппозного вируса Сендай удавалось освободить вирусный геном.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Изучение посттранскрипционных превращений вирусных мРНК в клетках разных линий, трансформированных SV40, показало, что в тотальном препарате РНК содержатся молекулы, комплементарные ранней нити ДНК SV40 на 22 — 69%, в то время как цитоплазматическая фракция РНК тех же клеток гибридизируется с Е-нитью лишь на 14 — 16% независимо от штамма клеток (Leong et al., 1976). Во…