19 июля 2012

Освобождение вирусного генома

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется.

Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация.

Трансформация осуществляется тогда, когда пермиссивные клетки заражены дефектным или неполным вирусом, или же концентрации клеточных факторов, необходимых для репликации, низки. В то же время продукция полного вируса трансформированными пермиссивными (или полупермиссивными) клетками не происходит, если вирусная ДНК находится в интегрированном состоянии.

Однако при этом могут синтезироваться вирусспецифические белки трансплантационного типа поверхностных мембран, Т-антигены и др.

Установлено, что вирусный геном освобождается из интегрированной формы в определенном (весьма незначительном) проценте посредством пока неизвестного механизма.

В популяции трансформированных клеток в тот или иной промежуток времени (иногда через сотни и более генераций) некоторые клетки (составляющие менее 0,01 % от общего числа клеток) начинают спонтанно реплицировать вирус, поэтому, чтобы выявить эту спорадически возникающую продукцию, требуется длительное наблюдение за культурой (Kit et al., 1975).

Важно подчеркнуть, что репликация освобожденного вируса осуществляется только в том случае, когда «спасен» недефектный геном и клетки содержат фактор, необходимый для репликации.

Если же интегрированная вирусная ДНК освобождается в непермиссивных клетках, то продукция полного инфекционного вируса отсутствует.

Репродукция онкорнавирусов, которые, как правило, трансформируют пермиссивные клетки природного хозяина, злокачественными новообразованиями определяется главным образом биологическими особенностями штамма, т. е. тем, дефектен он или нет.

С другой стороны, клетки неприродного хозяина являются в основном непермиссивной системой для онкорнавирусов сарком и в таких клетках не происходит продукция полного инфекционного вируса, даже если он недефектен.

Маркерами вирусных генов в таких клетках служат поверхностные вирусиндуцированные антигены, не входящие в состав варионов, и группоспецифические белки.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…

Изучение посттранскрипционных превращений вирусных мРНК в клетках разных линий, трансформированных SV40, показало, что в тотальном препарате РНК содержатся молекулы, комплементарные ранней нити ДНК SV40 на 22 — 69%, в то время как цитоплазматическая фракция РНК тех же клеток гибридизируется с Е-нитью лишь на 14 — 16% независимо от штамма клеток (Leong et al., 1976). Во…