16 июля 2012

Транскрипция интегрированного вирусного генома

Анализ многочисленных клеточных линий, трансформированных паповавирусами, показал, что специфика встраивания вирусного генома, обусловливающая трансформацию, обеспечивает, как правило, транскрипцию только ранней области вирусного генома.

Транскрипция интегрированной провирусной ДНК, по-видимому, начинается на клеточном промоторе и контролируется клеточными механизмами. Вместе с тем обнаружено, что импульсивно меченная РНК из клеток, трансформированных SV40, гибридизируется с ДНК SV40, содержащей значительное количество трифосфорилированных 5´-концов, тестируемых в щелочном гидролизате этой РНК как трифосфогуаниновые основания (Georgiev et al., 1976).

Показано, что во фрагменте этой РНК длиной около 100 нуклеотидов также содержатся 5´-три-фосфорилированные концы. Некоторые из них гибридизируются с ДНК SV40. Эти данные дают основания предполагать, что по крайней мере некоторые промоторы SV40 могут использоваться при инициации транскрипции в клетках трансформированных SV40.

Установлено, что РНК-полимераза функционирует на гибридной молекуле с такой же эффективностью, как и на клеточной ДНК, т. е. точки интеграции не являются терминирующими при действии фермента. В ядрах трансформированных клеток синтезируются гигантские молекулы вирусспецифической РНК с массой 1,5 — 10-106, которая в 2 — 3 раза превышает молекулярную массу вирусного генома.

Происходит это за счет того, что транскрипция осуществляется не только с вирусного генома, но и с прилегающих участков клеточного генома. Причем ядра клеток, инфицированных и трансформированных онковирусами, обладают механизмом (неким фактором), специфически разрезающим гигантские молекулы РНК таким образом, что в цитоплазму транспортируются вирусспецифические мРНК, которые содержат только вирусные последовательности.

Поскольку вирусный геном, встроенный в хромосомальную ДНК, имеет двунитевую структуру, принципиально важно выяснить характер транскрипции, т. е. происходит ли при синтезе вирусспецифической РНК асимметричное списывание с одной нити или же симметрично транскрибируются обе нити.

Оказалось, что в клетках, трансформированных паповавирусами, транскрипция ограничена лишь одной минус-Е-нитью, которой в разных клеточных линиях транскрибировалось от 22 до 75%. За редким исключением, весьма незначительная транскрипция осуществлялась и с L-нити (область поздних генов).

Хотя при литической инфекции на ранних стадиях и в трансформированных клетках транскрибируется приблизительно не более 1/3 вирусного генома, все же в трансформированных клетках списывается, вероятно, несколько больший фрагмент минус-Е-нити.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…