Идентичность геномов ВЭБ

Показана идентичность геномов ВЭБ, обнаруживаемых в клетках лимфомы Беркитта, карциноме носоглотки и при инфекционном мононуклеозе. Вирусная ДНК из клеток карциномы носоглотки в градиенте глицерина разделялась на два компонента: 101S и 64S, т. е. на ковалентнозамкнутую и открытую циркулярную формы ДНК соответственно. Наличие полноценных ковалентнозамкнутых форм вирусной ДНК подтверждено также электронной микроскопией.

Молекулярная масса циркулярных ДНК ВЭБ из клеток карциномы носоглотки составляет около 104Х10⁶. Анализ ДНК из клеток лимфомы Беркитта, изолированных непосредственно из опухолей больных детей, показал, что более 70% 105S ДНК локализовалось в зоне градиента, типичной для ковалентнозамкнутых форм ДНК с высокой плотностью сверхспирали.

Кроме этого установлено, что в хромо-сомальной ДНК из клеток лимфом и карцином с плавучей плотностью меньшей, чем плотность ДНК ВЭБ, присутствуют последовательности вирусного генома. Только с помощью фрагментации высокополимерной ДНК удается разделить клеточные и вирусспецифические последовательности ДНК, что свидетельствует об интегрированном состоянии вирусного генома в клетках лимфомы Беркитта и карциномы носоглотки (Kaschka-Dierich et al., 1976).

Значительная часть генома (около 39%) вируса герпеса 2-го типа тесно связана с повторяющимися последовательностями ДНК клеток рака шейки матки человека.

В то же время кинетика реассоциации ДНК HSV2, меченной 1251 и ДНК, выделенной из трансформированных этим вирусом клеток, свидетельствует о том, что на ранних пассажах культуры в клеточной ДНК определялось менее одного генома HSV2 на одну клетку (Minson et al., 1976: Thiry, 1976).

По мере пассирования культуры уровень выявляемой ДНК HSV2 снижался, пока не переставал обнаруживаться. ДНК HSV2 отсутствовала в клетках всех 20 клонов, полученных из этой культуры. Следовательно, при делении клеток, по-видимому, утрачиваются последовательности клеточной ДНК, комплементарные ДНК HSV2.

Вероятно, для поддержания трансформированного состояния достаточно присутствия в клетке лишь небольшого сегмента геномов 1-го и 2-го типов.

Мышиные клетки, дефектные по активности тимидинкиназы (tk^—), могут быть биохимически трансформированы в tk⁺-клетки УФ-облученными вирусами герпеса 1-то и 2-го типов (Sugino et al., 1977).

При исследовании четырех линий клеток, трансформированных вирусами герпеса, в них выявлены фрагменты вирусной ДНК, составляющие от 3 до 22% вирусного генома.

Дальнейший анализ трансформированных клонов и клонов ревертантов показал, что единичная копия вирусного tk-гена достаточна для биохимической трансформации.

При определении состава оснований фрагментов трансформирующей вирусной ДНК обнаружено, что эта ДНК имеет приблизительно такой же состав оснований, как и полный вирусный геном, и не содержит участков вирусной ДНК с малым количеством Г-Ц-пар. Перекрестная гибридизация между ДНК, трансформированных клеток вирусом герпеса 1-го типа, и ДНК вируса 2-го типа весьма незначительна.

Это свидетельствует о том, что ДНК, обнаруживаемая в клоне 139, не состоит целиком из последовательностей ДНК, обычных для вирусов 1-го и 2-го типов.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко