11 июля 2012

Идентичность геномов ВЭБ

Показана идентичность геномов ВЭБ, обнаруживаемых в клетках лимфомы Беркитта, карциноме носоглотки и при инфекционном мононуклеозе. Вирусная ДНК из клеток карциномы носоглотки в градиенте глицерина разделялась на два компонента: 101S и 64S, т. е. на ковалентнозамкнутую и открытую циркулярную формы ДНК соответственно. Наличие полноценных ковалентнозамкнутых форм вирусной ДНК подтверждено также электронной микроскопией.

Молекулярная масса циркулярных ДНК ВЭБ из клеток карциномы носоглотки составляет около 104Х106. Анализ ДНК из клеток лимфомы Беркитта, изолированных непосредственно из опухолей больных детей, показал, что более 70% 105S ДНК локализовалось в зоне градиента, типичной для ковалентнозамкнутых форм ДНК с высокой плотностью сверхспирали.

Кроме этого установлено, что в хромо-сомальной ДНК из клеток лимфом и карцином с плавучей плотностью меньшей, чем плотность ДНК ВЭБ, присутствуют последовательности вирусного генома. Только с помощью фрагментации высокополимерной ДНК удается разделить клеточные и вирусспецифические последовательности ДНК, что свидетельствует об интегрированном состоянии вирусного генома в клетках лимфомы Беркитта и карциномы носоглотки (Kaschka-Dierich et al., 1976).

Значительная часть генома (около 39%) вируса герпеса 2-го типа тесно связана с повторяющимися последовательностями ДНК клеток рака шейки матки человека.

В то же время кинетика реассоциации ДНК HSV2, меченной 1251 и ДНК, выделенной из трансформированных этим вирусом клеток, свидетельствует о том, что на ранних пассажах культуры в клеточной ДНК определялось менее одного генома HSV2 на одну клетку (Minson et al., 1976: Thiry, 1976).

По мере пассирования культуры уровень выявляемой ДНК HSV2 снижался, пока не переставал обнаруживаться. ДНК HSV2 отсутствовала в клетках всех 20 клонов, полученных из этой культуры. Следовательно, при делении клеток, по-видимому, утрачиваются последовательности клеточной ДНК, комплементарные ДНК HSV2.

Вероятно, для поддержания трансформированного состояния достаточно присутствия в клетке лишь небольшого сегмента геномов 1-го и 2-го типов.

Мышиные клетки, дефектные по активности тимидинкиназы (tk), могут быть биохимически трансформированы в tk+-клетки УФ-облученными вирусами герпеса 1-то и 2-го типов (Sugino et al., 1977).

При исследовании четырех линий клеток, трансформированных вирусами герпеса, в них выявлены фрагменты вирусной ДНК, составляющие от 3 до 22% вирусного генома.

Дальнейший анализ трансформированных клонов и клонов ревертантов показал, что единичная копия вирусного tk-гена достаточна для биохимической трансформации.

При определении состава оснований фрагментов трансформирующей вирусной ДНК обнаружено, что эта ДНК имеет приблизительно такой же состав оснований, как и полный вирусный геном, и не содержит участков вирусной ДНК с малым количеством Г-Ц-пар. Перекрестная гибридизация между ДНК, трансформированных клеток вирусом герпеса 1-го типа, и ДНК вируса 2-го типа весьма незначительна.

Это свидетельствует о том, что ДНК, обнаруживаемая в клоне 139, не состоит целиком из последовательностей ДНК, обычных для вирусов 1-го и 2-го типов.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…