9 июля 2012

Аденовирусы

При составлении генетических карт онкогенных вариантов аденовирусов использовали те же самые экспериментальные подходы, что и для мелких ДНК-содержащих онковирусов. При действии рестриктазы Е. coli RI на ДНК аденовируса человека 2-го типа образуется 6 фрагментов, последовательность которых в геноме А2 известна. Обнаружено, что ранние мРНК, содержащие поли-А-последовательности, транскрибировались в основном с А-, В- и D-фрагментов ДНК А2. Степень гибридизации с F-фрагментом была крайне низкой.

Поздние мРНК, также несущие поли-А-блоки, транскрибировались в основном с D-, Е- и F-фрагментов. Тотальный препарат ранних мРНК в полиакриламидном геле разделялся на три класса: 26S-, 19 — 20S и 12 — 15S мРНК Эти мРНК гибридизировались соответственно с фрагментами D, В и А ДНК А2. Кроме того, 13S мРНК гибридизировалась с фрагментами D и Е.

Выявлено два вида мРНК класса 13S, один из которых синтезировался только в ранней стадии инфекции, а второй — как в ранний, так и в поздний период, причем транскрипция в этом случае происходила с одного и того же фрагмента ДНК А2. 11S мРНК гибридизировалась с фрагментами А и В.

Гибридизирующаяся с С-фрагментом мРНК была гетерогенной по размерам. При электрофорезе поздних мРНК получены четыре класса мРНК: 27S, 24S, 19S и 11 — 15S. Все они гибридизировались с фрагментами Е и С, a 23S мРНК — с фрагментом F.

Ранняя мРНК комплементарна 25 — 50% легкой и 15% тяжелой нити, и ранняя область ДНК А2 включает последовательности фрагментов легкой нити D, Е и А и тяжелой нити — В, С и, возможно, части А.

Ранние мРНК располагаются на карте ДНК А2 в позициях 0,95; 0,80; 0,03; 0,65 и 0,69 ед. карты (Muwald et al., 1977). Поздняя мРНК содержит последовательности, составляющие 90 — 95% генома А2 (65 — 75% легкой и 15 — 25% тяжелой нити ДНК). Эти последовательности с легкой нити принадлежат фрагментам А, В, С и F и короткому сегменту фрагмента А тяжелой нити.

Аналогичные результаты получены и в экспериментах с вирусом А12 в пермиссивной системе (Smiley, Mak, 1976).

Таким образом, с помощью рестриктирующих эндонуклеаз установлено, что геном аденовирусов имеет совершенно иную организацию, чем генетический аппарат паповавирусов.

В отличие от последних, содержащих только один ранний F-ген, ранние функции аденовирусов кодируются шестью генами, несущими только 22% общего количества генетической информации. Эти гены локализованы в четырех дискретных участках генома, поровну распределенных между комплементарными нитями ДНК. Все эти гены картированы (Levino, 1976).

Обнаружено 10-кратное повышение активности РНК-полимераз II и III в ядрах клеток, продуктивно инфицированных вирусом А2.

Увеличение активности этих ферментов совпадало с усилением синтеза предшественников вирусных мРНК и 5,5S РНК А2 (Weinmann et al., 1976).


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…